Lazerinio konfokalinio mikroskopo veikimo principas
Lazerinio konfokalinio mikroskopo veikimo principas
Olympus lazerinis konfokalinis mikroskopas yra detektorius, galintis gauti signalus. Jo veikimo principas yra tas, kad taškinis šviesos šaltinis, praėjęs pro fluorescencinį mikroskopą, bus vaizduojamas kaip padidinta dėmė, vadinama „oriniu disku“. Standartiniame baltos šviesos interferometriniame konfokaliniame mikroskope šviesa, skleidžiama už židinio plokštumos, yra blokuojama skylute, kurios dydis lemia, kiek Airy disko gali patekti į detektorių. Kuo mažesnė skylutė, tuo vaizdas bus ryškesnis, o vaizdas blankesnis, nes prarandama didžioji dalis šviesos. Kuo mažesnė diafragmos skylutė, tuo geresnė skiriamoji geba, bet vėlgi, prarandamas daugiau šviesos signalo. Olympus lazerinis konfokalinis mikroskopas vienu metu gali pateikti spalvotą CCD vaizdą ir lazeriu skenuojantį konfokalinį vaizdą. „Olympus“ konfokaliniai lazeriniai mikroskopai gali išmatuoti aukštį naudojant vieno šviesos šaltinio, vieno mėginio ir vieno detektoriaus konfokalinę sąranką. Kai mėginys yra objektyvo lęšio židinio plokštumoje ir nuo mėginio paviršiaus atsispindėjusi lazerio šviesa sufokusuojama į konfokalinę apertūrą, fotodetektorius gaus signalą iš mėginio. Kai mėginys yra nefokusuotoje padėtyje, konfokalinė diafragma negauna lazerio signalo, todėl renkamas tik fokusuotas signalas. Ši funkcija gali realizuoti Olympus lazerinio konfokalinio mikroskopo optinio pjūvių funkciją.
Konfokalinės lazerinės mikroskopijos privalumai
1. Naudojant lazerio šviesą kaip šviesos šaltinį, pažymėjus atitinkamus fluorescencinius zondus, mėginys nuskaitomas taškas po taško, kad sluoksnis po sluoksnio būtų gaunami dvimačiai optiniai skerspjūvio vaizdai. Jis turi „ląstelių KT“ funkciją ir gali būti palaikomas kompiuterine trimačio atkūrimo programine įranga, kad būtų gauti trimačiai vaizdai, kuriuos galima pasukti bet kokiu kampu, kad būtų galima stebėti ląstelių ir audinių trimatę formą ir erdvinį ryšį;
2. Jis gali stebėti gyvas ląsteles ir audinius nepažeisdamas ir dinamiškai matuoti gyvų ląstelių fiziologinę informaciją, tokią kaip Ca jonų koncentracija ir pH vertė ląstelėse;
3. Jis gali išmatuoti ląstelės membranos sklandumą, tarpląstelinį ryšį, ląstelių susiliejimą, citoskeleto elastingumą ir tt, taip pat gali būti naudojamas kaip „lengvas peilis“ užbaigiant tarpląstelinę „operaciją“. Ši technologija leidžia in situ dinamiškai ir kiekybiškai stebėti ir matuoti gyvas ląsteles ir audinius.
