Kuo skiriasi fluorescencinė ir lazerinė konfokalinė mikroskopija?
fluorescencinis mikroskopas
1. Fluorescencinis mikroskopas yra prietaisas, kuris naudoja ultravioletinę šviesą kaip šviesos šaltinį, kad apšviestų tiriamą objektą, todėl jis skleidžia fluorescenciją, o po to stebi objekto formą ir padėtį po mikroskopu. Fluorescencinė mikroskopija naudojama tiriant medžiagų absorbciją, transportavimą, pasiskirstymą ir lokalizaciją ląstelėse. Kai kurios ląstelėse esančios medžiagos, pavyzdžiui, chlorofilas, po ultravioletinių spindulių poveikio gali skleisti fluorescenciją; Kai kurios medžiagos pačios gali nespinduliuoti, tačiau nudažytos fluorescenciniais dažais arba fluorescuojančiais antikūnais, jos taip pat gali skleisti fluorescenciją ultravioletiniais spinduliais. Fluorescencinė mikroskopija yra viena iš šių medžiagų kokybinių ir kiekybinių tyrimų priemonių.
2. Fluorescencinio mikroskopo principas:
(A) Šviesos šaltinis: šviesos šaltinis skleidžia įvairaus bangos ilgio šviesą (nuo ultravioletinių iki infraraudonųjų).
(B) Sužadinimo filtro šviesos šaltinis: perduodanti tam tikro bangos ilgio šviesą, kuri gali sukelti bandinio fluorescenciją, tuo pačiu blokuojant šviesą, kuri yra nenaudinga sužadinimo fluorescencijai.
(C) Fluorescenciniai mėginiai: dažniausiai nudažyti fluorescenciniais pigmentais.
(D) Blokuojantis filtras: selektyviai perduoda fluorescenciją blokuodamas sužadinimo šviesą, kurios nesugėrė bandinys, o kai kurie bangos ilgiai taip pat selektyviai perduodami fluorescencija. Mikroskopas, kuris naudoja ultravioletinę šviesą kaip šviesos šaltinį fluorescencijai iš apšvitinto objekto skleisti. Elektroninį mikroskopą 1931 m. Berlyne, Vokietijoje, pirmą kartą surinko Knorr ir Harroska. Šio tipo mikroskopuose vietoj šviesos pluošto naudojamas greitas elektronų pluoštas. Dėl daug trumpesnio elektronų srauto bangos ilgio, palyginti su šviesos bangomis, elektroninio mikroskopo padidinimas gali siekti 800000 kartų, o minimali skiriamoji geba yra 0,2 nanometro. Skenuojantis elektroninis mikroskopas, pradėtas naudoti 1963 m., leidžia žmonėms pamatyti mažytes objektų paviršiaus struktūras.
3. Taikymo sritis: naudojama mažų objektų vaizdams padidinti. Paprastai naudojamas stebėti biologiją, mediciną, mikroskopines daleles ir kt.
konfokalinis mikroskopas
1. Konfokalinis mikroskopas prie atspindėtos šviesos kelio prideda pusiau atspindintį lęšį, kuris per lęšį jau pralėkusią atspindėtą šviesą pakreipia kitomis kryptimis. Židinio taške yra pertvara su skylute, o mažoji skylė yra židinio taške. Už pertvaros yra fotodaugiklio vamzdis. Galima įsivaizduoti, kad prieš ir po aptikimo šviesos židinio taško atspindėta šviesa negali būti sufokusuota į mažą skylę per šią konfokalinę sistemą ir bus užblokuota pertvaros. Taigi fotometras matuoja atspindėtos šviesos intensyvumą židinio taške.
2. Principas: tradiciniuose optiniuose mikroskopuose naudojami lauko šviesos šaltiniai, o kiekvieno bandinio taško vaizdą paveiks difrakcija arba išsklaidyta šviesa iš gretimų taškų; Lazerinis skenuojantis konfokalinis mikroskopas naudoja lazerio spindulį, kad suformuotų taškinį šviesos šaltinį per apšviestą skylutę, kad būtų galima nuskaityti kiekvieną mėginio židinio plokštumos tašką. Apšviestas bandinio taškas atvaizduojamas aptikimo skylutėje, o po aptikimo skylutės taškas po taško ar linijos jį priima fotodaugintuvo vamzdelis (PMT) arba termoelektrinis sujungimo įtaisas (cCCD), greitai sukuriant fluorescencinį vaizdą kompiuterio monitoriuje. ekranas. Apšvietimo skylutė ir aptikimo skylutė yra konjuguotos objektyvo lęšio židinio plokštumos atžvilgiu. Židinio plokštumos taškai vienu metu sufokusuojami į apšvietimo skylutę ir spinduliavimo skylutę, o už židinio plokštumos esantys taškai nebus vaizduojami aptikimo skylutėje. Dėl to gaunamas konfokalinis vaizdas, atspindintis optinį mėginio skerspjūvį, pašalinant įprastos mikroskopijos neryškių vaizdų trūkumą.
3. Taikymo sritys: medicina, gyvūnų ir augalų tyrimai, biochemija, bakteriologija, ląstelių biologija, audiniai ir embrionai, maisto mokslas, genetika, farmakologija, fiziologija, optika, patologija, botanika, neuromokslai, jūrų biologija, medžiagų mokslas, elektronikos mokslas, mechanika, naftos geologija ir mineralogija.
