Du dažniausiai naudojami mikroskopinio stebėjimo metodai
1, Tamsaus lauko stebėjimas
Tamsus matymo laukas iš tikrųjų yra tamsaus lauko apšvietimas Jo charakteristikos skiriasi nuo šviesaus matymo lauko, nes jis tiesiogiai nestebi šviečiančios šviesos, o stebi atsispindėjusią arba išsklaidytą tiriamo objekto šviesą. Todėl matymo laukas tampa tamsiu fonu, o apžiūrimas objektas pateikia ryškų vaizdą.
Tamsaus lauko principas pagrįstas optiniu Tyndall reiškiniu, kai dulkių dalelių žmogaus akis negali pastebėti, kai jas veikia stipri šviesa dėl stiprios šviesos sukeltos difrakcijos Jei šviesa į ją nukreipiama įstrižai, atrodo, kad dalelių tūris dėl šviesos atspindžio didėja, todėl jos matomos žmogaus akiai.
Tamsaus lauko stebėjimui reikalingas specialus aksesuaras – tamsaus lauko prožektorius. Jo savybė yra ta, kad jis neleidžia šviesos pluoštui pereiti per objektą iš apačios į viršų, o keičia šviesos kelią įstrižai į objektą, kad apšvietimo šviesa nepatektų tiesiai į objektyvo lęšį, ir naudoja ryškų vaizdą, kurį sudaro atspindžio arba difrakcijos šviesa, nei stebėjimo laukas yra daug didesnė nei ryškus stebėjimo laukas. siekiančios iki 0,02-0,004
2, fazinio kontrasto veidrodžio tikrinimo metodas
Sėkmingas fazinio kontrasto mikroskopijos išradimas kuriant optinius mikroskopus yra svarbus šiuolaikinės mikroskopijos technologijos pasiekimas. Žinome, kad žmogaus akis gali atskirti tik šviesos bangų bangos ilgį (spalvą) ir amplitudę (ryškumą). Bespalvių ir skaidrių biologinių mėginių atveju, kai šviesa praeina, bangos ilgis ir amplitudė labai nesikeičia, todėl sunku stebėti mėginį ryškiame lauke.
Fazinio kontrasto mikroskopas naudoja tikrinamo objekto optinio kelio ilgio skirtumą veidrodiniam apžiūrai, efektyviai panaudojant šviesos trukdžių reiškinį, kad fazių skirtumą, kurio žmogaus akis negali atskirti, paverstų skiriančiu amplitudės skirtumu. Net bespalvės ir skaidrios medžiagos gali tapti aiškiai matomos Tai labai palengvina gyvų ląstelių stebėjimą, todėl fazinio kontrasto mikroskopija plačiai naudojama invertuotuose mikroskopuose
Pagrindinis fazinio kontrasto mikroskopijos principas yra paversti per bandinį praeinančios matomos šviesos optinio kelio skirtumą į amplitudės skirtumą, taip pagerinant kontrastą tarp įvairių struktūrų ir padarant jas aiškias ir matomas. Pratekėjusi pro bandinį šviesa lūžta, nukrypdama nuo pradinio optinio kelio ir vėluojama 1/4 λ (bangos ilgis). Jei optinio kelio skirtumas padidinamas arba sumažinamas dar 1/4 λ, optinio kelio skirtumas tampa 1/2 λ, o dviejų šviesos pluoštų trukdžiai padidėja arba sumažėja sujungus ašį, pagerinant kontrastą Struktūros požiūriu fazinio kontrasto mikroskopai turi du.
ypatingi skirtumai nuo įprastų optinių mikroskopų:
1. Žiedinė diafragma yra tarp šviesos šaltinio ir kondensatoriaus, o jos funkcija yra sudaryti tuščiavidurį šviesos kūgį, kuris praeina per kondensatorių ir sufokusuoja bandinį.
2. Kampinės fazės plokštė: prie objektyvo lęšio pridedama fazinė plokštė, padengta magnio fluoridu, kuri gali 1/4 λ atitolinti tiesioginės arba difrakcinės šviesos fazę. Jį galima suskirstyti į du tipus:
(1) . A+fazės plokštė: atidėkite tiesioginę šviesą 1/4 λ ir, sujungę ašis, pridėkite du šviesos bangų rinkinius. Amplitudė didėja, o bandinio struktūra tampa ryškesnė nei aplinkinė terpė, todėl susidaro ryškus kontrastas (arba neigiamas kontrastas).
(2) . B+fazės plokštelė: atidėkite difrakcuotą šviesą 1/4 λ ir sujungę dviejų šviesos spindulių rinkinių ašis atimkite šviesos bangas, todėl amplitudė sumažėja ir susidaro tamsus kontrastas (arba teigiamas kontrastas). Struktūra tampa tamsesnė nei aplinkinė terpė
