Fluorescencinio mikroskopo paskirtis, savybės ir naudojimas
Fluorescencinio mikroskopo principas ir struktūrinės charakteristikos: fluorescencinis mikroskopas naudoja taškinį šviesos šaltinį, turintį didelį šviesos efektyvumą, kad išspinduliuotų tam tikro bangos ilgio šviesą (pvz., ultravioletinę šviesą 3650 colių arba purpurinę mėlyną šviesą 4200 colių) per filtrų sistemą kaip sužadinimą. šviesa, kad būtų stimuliuojama mėginio fluorescencija. Po to, kai medžiaga skleidžia įvairių spalvų fluorescenciją, ji stebima padidinus objektyvo lęšį ir okuliarą. Tokiu būdu, esant stipriam kontrastiniam fonui, net jei fluorescencija yra labai silpna, ją lengva atpažinti ir jos jautrumas yra didelis. Jis daugiausia naudojamas ląstelių struktūros ir funkcijos bei cheminės sudėties tyrimams. Pagrindinę fluorescencinio mikroskopo struktūrą sudaro įprastas optinis mikroskopas ir kai kurie priedai (pvz., fluorescencinis šviesos šaltinis, sužadinimo filtras, dviejų spalvų pluošto skirstytuvas ir blokuojantis filtras ir kt.). Fluorescencinis šviesos šaltinis – paprastai naudojama itin aukšto slėgio gyvsidabrio lempa (50-200W), kuri gali skleisti įvairaus bangos ilgio šviesą, tačiau kiekviena fluorescencinė medžiaga turi sužadinimo bangos ilgį, kuris sukuria stipriausią fluorescenciją, taigi sužadinimo filtras ( Paprastai yra ultravioletinių, violetinių, mėlynų ir žalių sužadinimo filtrai), kurie leidžia tik tam tikro bangos ilgio sužadinimo šviesai prasiskverbti ir apšvitinti bandinį, o sugerti kitą šviesą. Po to, kai kiekviena medžiaga yra apšvitinta sužadinimo šviesa, ji per labai trumpą laiką skleidžia matomą fluorescenciją, kurios bangos ilgis yra ilgesnis nei švitinimo bangos ilgis. Fluorescencija yra specifinė ir paprastai silpnesnė nei sužadinimo šviesa. Norint stebėti specifinę fluorescenciją, už objektyvo lęšio reikalingas blokuojantis (arba slopinantis) filtras.
Jis turi dvi funkcijas: viena – sugerti ir blokuoti sužadinimo šviesą, kad ji nepatektų į okuliarą, kad nebūtų sutrikdyta fluorescencija ir nepažeistų akių; kita yra pasirinkti ir leisti specifinei fluorescencijai praeiti, rodant specifinę fluorescencinę spalvą. Du filtrai turi būti naudojami kartu.
Atsižvelgiant į jų optinius kelius, yra dviejų tipų fluorescenciniai mikroskopai:
1. Perdavimo fluorescencinis mikroskopas: sužadinimo šviesos šaltinis pro mėginio medžiagą per kondensatoriaus lęšį praleidžiamas fluorescencijai sužadinti. Paprastai naudojamas tamsaus lauko kolektorius, o įprastu kolektorius taip pat galima reguliuoti veidrodį taip, kad sužadinimo šviesa būtų nukreipta ir apeinama į bandinį. Tai senesnis fluorescencinis mikroskopas. Privalumas yra tas, kad fluorescencija yra stipri esant mažam padidinimui, tačiau trūkumas yra tas, kad fluorescencija mažėja didėjant didinimui. Todėl geriau stebėti didesnių bandinių medžiagas.
2. Epifluorescencinis mikroskopas yra naujo tipo fluorescencinis mikroskopas, sukurtas šiais laikais. Skirtumas yra tas, kad sužadinimo šviesa nukrenta nuo objektyvo iki bandinio paviršiaus, tai yra, tas pats objektyvas naudojamas kaip apšvietimo kondensatorius ir objektyvo lęšis fluorescencijai surinkti. Šviesos kelyje, kuris yra 45 laipsnių atstumu nuo šviesaus urano, reikia pridėti dichroinį pluošto skirstytuvą. Sužadinimo šviesa atsispindi objektyvo lęšyje ir surenkama ant mėginio. Mėginio generuojama fluorescencija ir sužadinimo šviesa, kurią atspindi objektyvo lęšio lęšio paviršius ir dengiančiojo stiklo paviršius, tuo pačiu metu patenka į objektyvo lęšį ir grįžta į dviejų spalvų pluošto skirstytuvą, kad sužadinimo šviesa būtų atskirta nuo fluorescencijos. , likutinę sužadinimo šviesą sugeria blokuojantys filtrai. Pavyzdžiui, pakeitus skirtingų sužadinimo filtrų / dviejų spalvų pluošto skirstytuvo / blokuojančių filtrų derinį, jis gali patenkinti skirtingų fluorescencinių reakcijos produktų poreikius. Šio tipo fluorescencinio mikroskopo pranašumas yra tas, kad matymo lauko apšvietimas yra vienodas, vaizdas yra aiškus ir kuo didesnis padidinimas, tuo stipresnė fluorescencija.
(2) Kaip naudoti fluorescencinį mikroskopą.
1. Įjunkite šviesos šaltinį ir itin aukšto slėgio gyvsidabrio lempa turi keletą minučių sušilti, kad pasiektų ryškiausią tašką.
2. Perdavimo fluorescenciniame mikroskope tarp šviesos šaltinio ir kondensatoriaus reikia sumontuoti reikiamą sužadinimo filtrą, o už objektyvo lęšio – atitinkamą blokuojantį filtrą. Epifluorescenciniuose mikroskopuose į optinio kelio plyšius reikia įkišti reikiamą sužadinimo filtrą/dviejų spalvų pluošto skirstytuvą/blokavimo filtrą.
3. Stebėkite su mažo didinimo lęšiu ir nustatykite šviesos šaltinio centrą taip, kad jis būtų visos apšvietimo taško centre pagal skirtingų modelių fluorescencinių mikroskopų reguliavimo įtaisą.
4. Padėkite mėginio gabalėlį ir sufokusavus stebėkite. Naudojimo metu reikia atkreipti dėmesį: nežiūrėkite tiesiai į galinį filtrą, kad nepažeistumėte akių; stebėdami mėginius su alyvos lęšiu, turite naudoti specialų aliejinį lęšį be fluorescencijos; išjungus aukšto slėgio gyvsidabrio lempą, jos iš karto vėl įjungti negalima, ją reikia išbandyti. Jis gali būti paleistas iš naujo po 5 minučių, kitaip jis bus nestabilus ir paveiks gyvsidabrio lempos tarnavimo laiką.
(3) Stebėjimas Naudojant mėlynai violetinės šviesos filtrą po fluorescenciniu mikroskopu mokymo platformoje, galima pastebėti, kad o. 01 procentas ląstelių, nudažytų akridino oranžiniais fluorescenciniais dažais, branduolys ir citoplazma sužadinami, kad susidarytų dvi skirtingos fluorescencijos spalvos (tamsiai žalia ir oranžinė raudona).
