Skirtumas tarp dviejų fotonų mikroskopijos ir lazerinės konfokalinės mikroskopijos
Lazerinis konfokalinis mikroskopas – tai stebėjimo, analizės ir išvesties sistemų rinkinys, naudojant lazerį kaip šviesos šaltinį, konjuguoto fokusavimo principą ir įrenginį tradicinio optinio mikroskopo pagrindu bei stebimo objekto skaitmeninį vaizdo apdorojimą kompiuteriu. Pagrindinės sistemos apima lazerinius šviesos šaltinius, automatinius mikroskopus, skenavimo modulius (įskaitant konfokalinius optinio kelio kanalus ir skylutes, nuskaitymo veidrodžius, detektorius), skaitmeninius signalų procesorius, kompiuterius ir vaizdo išvesties įrenginius (ekranus, spalvotus spausdintuvus). Naudojant lazerinį skenuojantį konfokalinį mikroskopą, galima atlikti stebimo mėginio tomografiją ir vaizdavimą. Todėl galima stebėti ir analizuoti trimatę ląstelių erdvinę struktūrą nepažeidžiant.
Tuo pačiu metu lazerinė skenavimo konfokalinė mikroskopija taip pat yra galingas įrankis dinamiškam gyvų ląstelių stebėjimui, daugybiniam imunofluorescenciniam ženklinimui ir jonų fluorescenciniam ženklinimui. Jis tiksliai analizuoja spektro esmę ir atskiria signalus iš skirtingų etikečių, kurių emisijos spektrai labai persidengia.
Svarbiausias dalykas yra tai, kad kelių spalvų fluorescencinis dažymas gali visiškai pašalinti fluorescencijos skersinio pokalbio įtaką, tuo pačiu sumažinant mėginio fluorescencinio signalo praradimą. Tai yra dalykai, kurių įprasti veidrodžiai negali pasiekti.
Židinio nuotolio santykis tarp mikroskopo objektyvo ir okuliaro
Skirtingi principai
1. Fluorescencinis mikroskopas: naudoja ultravioletinę šviesą kaip šviesos šaltinį bandomam objektui apšviesti, todėl jis skleidžia fluorescenciją, o po to stebi objekto formą ir padėtį po mikroskopu.
2. Lazerinis konfokalinis mikroskopas: remiantis fluorescencinės mikroskopijos vaizdavimu, sumontuotas lazerinis skenavimo įrenginys, skirtas sužadinti fluorescencinius zondus naudojant ultravioletinę arba matomą šviesą.
Skirtingos charakteristikos
1. Fluorescencinis mikroskopas: naudojamas tirti medžiagų absorbciją, transportavimą, pasiskirstymą ir lokalizaciją ląstelėse. Kai kurios ląstelėse esančios medžiagos, pavyzdžiui, chlorofilas, po ultravioletinių spindulių poveikio gali skleisti fluorescenciją; Kai kurios medžiagos pačios gali nespinduliuoti, tačiau nudažytos fluorescenciniais dažais arba fluorescuojančiais antikūnais, jos taip pat gali skleisti fluorescenciją ultravioletiniais spinduliais.
2. Lazerinis konfokalinis mikroskopas: kompiuterio naudojimas vaizdo apdorojimui, norint gauti fluorescencinius ląstelių ar audinių mikrostruktūros vaizdus ir stebėti fiziologinius signalus, tokius kaip Ca2+, pH vertę, membranos potencialą ir ląstelių morfologijos pokyčius. tarpląsteliniame lygyje.
