Stereo fluorescencinio mikroskopo naudojimas ir atsargumo priemonės
Instrukcijos:
(1) Padėkite medžiagos lapą ant scenos.
(2) Įjunkite fluorescencinio mikroskopo įtampos stabilizatorių. Tada paspauskite starto grupę, kad uždegtumėte UV lempą ir neišjunkite jos per 15 minučių, o vėl neįjunkite per 3 minutes po jos išjungimo.
(3) Pasukite sužadinimo filtrą į v, spalvų atskyrimo filtrą į v ir pasirinkite 495 arba 475 nm blokuojantį filtrą.
(4) Mikroskopiniam tyrimui pasirinkite fluorescencinį objektyvo mikroskopą uvFL40, uvFL100.
(5) Ant stiklelio įpilkite nefluorescencinės alyvos, pirmiausia naudokite 40 kartų, tada patikrinkite 100 kartų fokusuojančiu mikroskopu. Atsiranda fluorescencija.
(7) Kadangi fluorescencinių medžiagų fluorescencija laipsniškai silpnėja, kai jos yra apšvitintos ultravioletine šviesa, mikroskopinio tyrimo metu regėjimo laukas turėtų būti dažnai keičiamas.
(8) uvFL10 arba uvFL20 mažo didinimo mikroskopai taip pat gali būti naudojami medžiagoms tikrinti (naudojant mažos galios lęšius nepilama fluorescencinės alyvos).
Fluorescencinio vaizdo įrašymo būdas:
Fluorescenciniu mikroskopu matomas fluorescencinis vaizdas turi ir morfologines charakteristikas, ir fluorescencinę spalvą bei ryškumą. Vertinant rezultatus, jie turi būti derinami, kad būtų galima visapusiškai įvertinti. Rezultatai registruojami remiantis subjektyviais rodikliais, tai yra darbuotojų vizualiniu stebėjimu. Kaip bendras kokybinis stebėjimas, iš esmės patikimas. Tobulėjant technologijoms ir mokslui, objektyvūs rodikliai, pavyzdžiui, ląstelių spektrofotometrai, vaizdo analizatoriai ir kiti instrumentai, naudojami įvairiems vertinimo rezultatams įrašyti. Tačiau šiais instrumentais užfiksuoti rezultatai taip pat turi būti derinami su subjektyviais sprendimais.
Fluorescencinio mikroskopo fotografavimas yra labai reikalingas fluorescenciniams vaizdams įrašyti. Kadangi fluorescencija lengvai išnyksta ir susilpnėja, rezultatus būtina registruoti realiu laiku. Metodas iš esmės yra toks pat kaip ir įprastos mikrofotografijos. Tiesiog reikia naudoti didelės spartos šviesai jautrią plėvelę, tokią kaip ASA200 arba naujesnė arba 24. aukštesnė. Kadangi ultravioletinė šviesa stipriai veikia fluorescencijos gesinimą, pvz., FITC žymenys, fluorescencijos ryškumas sumažės 50 procentų, kai 30 sekundžių apšvitinama ultravioletine šviesa. Todėl, jei ekspozicijos greitis yra per mažas, fluorescencinio vaizdo padaryti nepavyks. Bendrųjų tyrimų fluorescenciniai mikroskopai turi pusiau automatinius arba visiškai automatinius fotomikrografijos sistemos įrenginius.
Atsargumo priemonės:
(1) Dirbkite griežtai pagal fluorescencinio mikroskopo gamyklos instrukcijų reikalavimus ir nekeiskite programos savo nuožiūra.
(2) Patikra turi būti atliekama tamsioje patalpoje. Įėję į tamsų kambarį, prijunkite maitinimo šaltinį ir uždegkite itin aukšto slėgio gyvsidabrio lempą 5-15 minutes. Kai stipri šviesa iš šviesos šaltinio yra stabili, akys visiškai prisitaiko prie tamsaus kambario ir pradeda stebėti mėginį.
(3) Kad ultravioletiniai spinduliai nepakenktų akims, reguliuojant šviesos šaltinį reikia dėvėti apsauginius akinius.
(4) Patikrinimo laikas pageidautina yra 1-2 valandos kiekvieną kartą. Jei jis viršija 90 minučių, itin aukšto slėgio gyvsidabrio lempos šviesos intensyvumas palaipsniui mažės, o fluorescencija susilpnės; po to, kai mėginys yra apšvitintas ultravioletiniais spinduliais 3-5 minutes, fluorescencija taip pat labai susilpnės; todėl jis neturėtų viršyti daugiausia 2-2 valandų. 3 val.
(5) Fluorescencinio mikroskopo šviesos šaltinio eksploatavimo laikas yra ribotas, todėl mėginiai turi būti tikrinami kartu, kad būtų sutaupytas laikas ir apsaugotas šviesos šaltinis. Kai oras karštas, reikia įdėti ventiliatorius, kad išsklaidytų šilumą, o naujas lemputes registruoti nuo jų naudojimo pradžios. Jei norite vėl ją naudoti po to, kai lemputė užges, prieš uždegdami turite palaukti, kol lemputė pakankamai atvės. Venkite uždegti šviesos šaltinį kelis kartus per dieną.
(6) Stebėkite mėginį iškart po dažymo, nes laikui bėgant fluorescencija palaipsniui silpnės. Jei mėginys laikomas polietileniniame plastikiniame maišelyje 4 laipsnių temperatūroje, fluorescencijos susilpnėjimo laikas gali būti atidėtas ir tvirtinimo medžiaga neišgaruoja.
(7) Fluorescencijos ryškumo vertinimo standartas: paprastai jis skirstomas į keturis lygius, tai yra "vienas" – fluorescencija nėra arba ji silpna. „plius“ – matoma tik aiškiai matoma fluorescencija. „plius plius“ – matomas ir ryškus
