Įprastų mėginių ruošimo mikroskopijai reikalavimai
Konfokalinis mikroskopas yra epochą formuojantis aukštųjų technologijų naujas produktas, sukurtas devintajame dešimtmetyje, ir šiandien yra vienas iš svarbiausių analizės instrumentų molekulinėje biologijoje ir gyvosios gamtos moksle. Konfokalinė mikroskopija pagrįsta fluorescenciniu mikroskopiniu vaizdavimu su pridėtu lazeriniu skenavimo įrenginiu, naudojant kompiuterį vaizdo apdorojimui, siekiant gauti fluorescencinius mikrostruktūros vaizdus ląstelių ar audinių viduje ir stebėti daugelio fiziologinių signalų mašinų morfologijos pokyčius tarpląsteliniame lygmenyje. Tapkite galingu tyrimų įrankiu morfologijos, molekulinių ląstelių biologijos, neurologijos, farmakologijos, genetikos ir kitų mokslo sričių srityse.
Mėginio paruošimas konfokalinei mikroskopijai yra svarbus žingsnis prieš aptikimą. Mėginiai turi būti pažymėti fluorescenciniais zondais (viengubu, dvigubu, trigubu).
į
Mėginiai gali būti fiksuoti arba gyvi audiniai arba fiksuotos arba gyvos prilipusios kultūros. Ląstelės turi būti kultivuojamos ant specialių Confocal mažų kultūros indų arba dengiamųjų stiklelių. Sukabinkite ląsteles, suplakite arba numeskite griežinėlius ir uždenkite dengiamąja plėvele. Mėginio Zda storis yra apie 1–2 mm, naudojamo dengiamojo stiklo storis turi būti mažesnis nei 0,17 mm, o slankiojančio stiklo storis turi būti nuo 0,8–1,2 mm, o paviršius lygus, storis vienodas ir nėra akivaizdžios trukdžių fluorescencijos. Tvirtinimo terpė dažnai naudojama fiksuotiems mėginiams, o tvirtinimui dažniausiai naudojamas glicerolis, paruoštas PBS, kurio pH yra 8.5-9.
Įprasto mėginio ruošimo reikalavimai:
1. Dažų parinkimas
Kadangi konfokaliniame mikroskope kaip šviesos šaltinis naudojamas vieno bangos ilgio lazeris, fluorescenciniai dažai turėtų būti parenkami atsižvelgiant į lazerio, kuriame įrengtas konfokalinis mikroskopas, bangos ilgį. Jei tame pačiame mėginyje yra keli fluorescenciniai dažai, reikėtų kiek įmanoma labiau atsižvelgti į jų emisijos bangos ilgį. Nepersidengkite, kad išvengtumėte kryžminių spalvų problemų.
2. Mėginio nešiklio parinkimas
Paprastai didelės galios konfokalinio mikroskopo objektyvas yra alyvos lęšis, jo skaitmeninė diafragma yra maža, o darbinis atstumas tarp objektyvo ir mėginio turi būti ne didesnis kaip 0,17 mm. Skaidrės ir dengiamieji stikleliai yra gerai. Jei tai yra suspenduotos ląstelės arba suspenduotos dalelės, mėginiui stebėti galima naudoti konfokaliniam mikroskopui skirtą Petri lėkštelę.
3. Montavimo terpės parinkimas
Jei mėginį reikia stebėti tik vieną kartą, o fluorescencija nėra lengvai užgesinama, stikleliui užsandarinti galite pasirinkti tam tikrą glicerolio mišinio koncentraciją. Jei mėginį reikia dėti tam tikrą laiką ir paimti kelis kartus, reikia pasirinkti antifluorescencinę gesinimo terpę, kad būtų sumažintas fluorescencinių signalų praradimas.
