Fluorescencinės mikroskopijos principai ir struktūros ypatumai
Fluorescencinis mikroskopas – tai didelio taškinio šviesos šaltinio šviesos efektyvumo panaudojimas per spalvų filtravimo sistemą, kad būtų išspinduliuojamas tam tikro bangos ilgio šviesa (pvz., ultravioletinė 3650 arba violetinė-mėlyna 4200), kaip sužadinimo šviesa, fluorescencinės medžiagos sužadinimas viduje. mėginys skleidžia įvairių spalvų fluorescenciją, o tada padidinamas per objektyvą ir okuliarus, kad būtų galima stebėti. Tokiu būdu stipraus kontrasto fone, net jei fluorescencija yra labai silpna, ją lengva atpažinti, didelis jautrumas, daugiausia naudojamas ląstelių struktūrai ir funkcijoms bei cheminei sudėčiai tirti. Pagrindinę fluorescencinio mikroskopo struktūrą sudaro įprastas optinis mikroskopas ir kai kurie priedai (pvz., fluorescencinis šviesos šaltinis, sužadinimo filtrai, dviejų spalvų pluošto separatorius ir blokuojantys filtrai ir kt.). Fluorescencinis šviesos šaltinis – dažniausiai naudojama itin aukšto slėgio gyvsidabrio lempa (50-200W), kuri gali skleisti įvairaus ilgio šviesą, tačiau kiekviena fluorescencinė medžiaga turi stipriausią fluorescencinės sužadinimo bangos ilgį, todėl reikia pridėti sužadinimo filtrus (paprastai ultravioletinis, violetinis, mėlynas ir žalias sužadinimo filtras), kad tik tam tikras sužadinimo šviesos bangos ilgis būtų apšvitintas bandiniais, o kita šviesa būtų absorbuojama. Taigi būtina pridėti sužadinimo filtrą (dažniausiai ultravioletinius, violetinius, mėlynus ir žalius sužadinimo filtrus), kad per bandinį tik tam tikro bangos ilgio sužadinimo šviesa, o kita šviesa būtų sugerta. Kai kiekviena medžiaga yra apšvitinama sužadinimo šviesa, ji per labai trumpą laiką skleidžia matomą ilgesnio bangos ilgio fluorescenciją nei apšvitinta šviesa. Fluorescencijos specifiškumas paprastai yra silpnesnis nei sužadinimo šviesa, kad būtų galima stebėti specifinę fluorescenciją objektyvo lęšyje, už kurio reikia pridėti blokavimo (arba slopinimo) filtrą.
Jo vaidmuo yra dvejopas:
Vienas iš jų yra sugerti ir blokuoti sužadinimo šviesą į okuliarą, kad nebūtų sutrikdyta fluorescencija ir akių pažeidimas.
Antrasis yra pasirinkti ir praleisti specifinę fluorescenciją, rodant specifinę fluorescencinę spalvą. Dviejų tipų filtrai turi būti parinkti ir naudojami kartu.
