Išankstinis fluorescencinės mikroskopijos tyrimas ir koregavimas:
(1) Prieš kiekvieną fluorescencijos stebėjimą būtina reguliariai tikrinti fluorescencinio įtaiso gijų išlygiavimą, optinio kelio fokusavimą, diafragmos diafragmą ir matymo lauko diafragmos nustatymus.
(2) Ar keitiklyje yra sumontuoti reikalingi fluorescencinio sužadinimo / emisijos filtro komponentai, ar tinkamai sukonfigūruotas fluorescencinio mikroskopo objektyvas ir ar prieš objektyvo lęšį pašalintos alyvos dėmės ir dulkės.
(3) Panašiai, stebint skleidžiamos šviesos skirtumą, būtina patikrinti fokusuojančio lęšio konjugaciją su centru ir kontrastinio žiedo su objektyvo lęšiu.
(4) Patikrinkite, ar ant mėginio laikiklio (stiklinio stiklelio, dengiamojo stiklo ir kitų indų) nepakibo skysčio arba dulkių, ir ar storis atitinka objektyvo lęšio kalibruotą darbinio atstumo diapazoną. Pjaustyti mėginiai neturi būti per stori, rekomenduojamas maždaug 10 μm arba mažesnis.
(5) Kadangi apšvietimo šaltinyje yra ultravioletinių spindulių, virš pakrovimo platformos reikia uždėti rudą skėtį nuo saulės, kad būtų išvengta ultravioletinių spindulių poveikio tinklainei.
(6) Nestabili įtampa gali sumažinti aukštos įtampos gyvsidabrio lempų tarnavimo laiką, todėl prie šviesos šaltinio maitinimo šaltinio reikia pridėti įtampos reguliatorių.
(7) Kad gyvsidabrio lempa tarnautų ilgiau, ją galima išjungti tik praėjus 15 minučių po įjungimo; Išjungus gyvsidabrio lempos fluorescencinį maitinimą, ji turi palaukti bent 10 minučių, kad gyvsidabrio garai vėl atvėstų iki pradinės būsenos, priešingu atveju tai turės įtakos lempos eksploatavimo trukmei.
Fluorescencinio mikroskopo vaizdų stebėjimas:
(1) Įjungus fluorescencinės lempos šaltinį maždaug 5-10 min., sužadinimo intensyvumas linkęs stabilizuotis, o mėginys pakraunamas stebėjimui; Kad per didelis šviesos sužadinimas fokusuojant ir ieškant vaizdų nesukeltų mėginio fluorescencinio gesinimo, pirmiausia sumažinama fluorescencinio mikroskopo diafragma arba pridedamas ND filtras sužadinimui sureguliuoti iki vidutinio intensyvumo, o mėginio stadija perkeliama. reguliariai. Nustačius veidrodinį vaizdą, įrašymui jis sureguliuojamas į fluorescencinę būseną.
(2) Reguliavimas esant prastai vaizdo kokybei. Būtinos koregavimo priemonės, kurių galima imtis, išskyrus mėginio paruošimo veiksnius, yra šios:
① Į vaizdo gavimo optinį kelią neįtraukite šešėliavimo ar ribojančių įrenginių, pvz., DIC priedų, ND filtrų ir kt.
② Iš naujo sureguliuokite fluorescencinio mikroskopo kolektoriaus fokusavimo ir diafragmos diafragmą.
③ Atsargiai sureguliuokite fluorescencinio mikroskopo objektyvo aprėpties korekcijos žiedą.
