PH matuoklis – terpės pH nustatymas ir reguliavimas
Visus mikroorganizmus veikia aplinkos, kurioje jie gyvena, pH. Dažnai selektyvių rūšių buvimas susiaurina pH diapazoną, kuriame jie auga. Kartais terpės rūgštingumas arba šarmingumas taip pat gali veikti kaip augimo atrankos veiksnys. Tačiau biocheminių bandymų terpės pH diapazonas, kuriame mikroorganizmai demonstruoja tk aktyvumą substrate, yra siauresnis nei augimui reikalingas pH diapazonas: todėl svarbu terpės pH sureguliuoti iki numatomo diapazono. Kai laboratorija ruošia terpę pagal terpės sudėtį, turi būti patikrintas ir sureguliuotas pH. Pažymėtina, kad net ir paruoštos sintetinės dehidratuotos terpės, kurią pateikia gamintojas (ypač kai kurioms pradinėms dehidratuotoms terpėms), galutinį pH reikia išmatuoti jau pagaminus eksperimentinę terpę.
Tiksliausias būdas išmatuoti terpės pH yra pH matuoklis. Prieš naudojimą jis turi būti sukalibruotas standartiniu buferiniu tirpalu, kurio pH yra žinomas (paprastai pH yra nuo 4 iki 7). Nuplaukite pH matuoklio elektrodą distiliuotu vandeniu ir panardinkite į laboratorinę terpę, o po to iš pH-metro skalės nuskaitykite auginimo terpės pH. Kiekvienas gamintojas pateikia išsamias kiekvieno tipo pH matuoklio naudojimo instrukcijas.
Ruošiant auginimo terpę, pH galima lengvai reguliuoti naudojant pH matuoklį su mechaniniu maišymu. Auginimo terpė turi būti ruošiama talpykloje (pvz., didelėje stiklinėje), kurią būtų galima nuolat maišyti. arba teflonu aptraukti magnetai. Agaro turinčios terpės pH reikia reguliuoti po atšildymo, tai nesunku padaryti šildoma magnetine maišykle. Reguliuodami pH, naudokite standartinį žinomo pH buferinį tirpalą, kad pirmiausia sukalibruotumėte pH metrą. Tada įdėkite kompozitinį elektrodą ir varžos termometrą (jei yra) į terpę, lėtai įpilkite atitinkamą kiekį druskos rūgšties ir natrio hidroksido nuo stiklinės galo toliau nuo elektrodo, kad terpė pasiektų ir išlaikytų reikiamą pH.
pH-metro temperatūros kompensavimas turėtų būti atliekamas atsižvelgiant į temperatūros poveikį elektrodų sistemai: kai kuriuose skiedimuose ir terpėse pH labai kinta priklausomai nuo temperatūros. Skystoms terpėms ir skiedimams pH paprastai galima reguliuoti ir matuoti esant 25 laipsniams arba toje temperatūroje, kurioje jie naudojami.
Ištirpinus turi būti reguliuojamas agaro terpės pH, o tirpimo temperatūra viršija 45 laipsnius, todėl kietos terpės pH turi būti nustatomas jos naudojimo temperatūroje. Šiuo metu reikia naudoti plokščiagalvį kompozitinį elektrodą ir rankiniu būdu kalibruoti pH-metro temperatūros kompensaciją. Ruošiant auginimo terpę, jei nustatoma, kad tarp lydymosi ir kietėjimo būsenos skiriasi terpės pH, tai reiškia, kad yra pH reguliavimo klaida.
Panašiai, kai paruošta terpė termiškai sterilizuojama (pvz., autoklave), joje taip pat gali pasikeisti pH. Dehidratuotos terpės atveju gamintojas į tai atsižvelgė ir paprastai pH reguliuoti nereikia, tačiau reikia atidžiai patikrinti naudojamos terpės pH. Jei dehidratuotos agaro terpės pH turi būti reguliuojamas pakartotinai tirpinant ar ruošiant, geriausia jį reguliuoti filtruotu druskos rūgštimi ir natrio hidroksido tirpalu po sterilizavimo, kad nesusidarytų terpės perkaitimas. Ruošiant terpę su skirtingomis žaliavomis ar vaistiniais preparatais, po autoklavavimo reikia patikrinti terpės pH. Be to, jei nustatoma, kad po kiekvieno autoklavo terpės pH keičiasi taip pat, ruošiant terpę pH gali būti atitinkamai sureguliuotas. Tačiau vis tiek būtina nustatyti galutinį terpės pH po sterilizacijos.
