Mikroskopo stiklelių gamybos būdas
Yra trys mikroskopo stiklelių gamybos būdai:
1. Tepinėlio metodas
Tepinėlis – tai paruošimo būdas, kai medžiaga tolygiai paskirstoma ant stiklelio.
Tepinėliams priskiriami vienaląsčiai organizmai, smulkūs dumbliai, kraujas, bakterijų kultūros, laisvi augalų ir gyvūnų audiniai, spermatozoidų lizdai, dulkiniai ir kt.
Tepdami reikia atkreipti dėmesį:
(1) Skaidrė turi būti švari.
(2) Skaidrė turi būti laikoma plokščia.
3) Danga turi būti vienoda. Dengimo skysčio lašelį užlašinkite stiklelio centro dešinėje ir gerai paskirstykite pjaustymo peilio ašmenimis ar dantų krapštuku ir pan.
4) Danga turi būti plona. Naudokite kitą stiklelį kaip stūmiklį, švelniai stumkite iš dešinės į kairę išilgai stiklelio paviršiaus su lašeliu tepimo tirpalo (kampas tarp dviejų stiklelių turi būti 30–45 laipsnių) ir užtepkite tolygiai ploną sluoksnį.
5) Fiksavimas. Jei reikia fiksuoti, naudokite cheminę fiksaciją arba sausinamąją (bakterinę) fiksaciją.
6) Dažymas. Bakterijoms naudokite metileno mėlyną, o kraujui – Rachelės dėmę. Dažymo tirpalas turi padengti visą padengtą paviršių.
7) Nuplaukite. Sugerti ant sugeriančio popieriaus arba kepti sausai.
8) Užsandarinkite plėvelę. Ilgalaikiam saugojimui naudokite Kanados medžių plėvelę.
2. Plėvelės presavimo būdas
Slėgio plėvelės metodas yra biologinė medžiaga, dedama tarp stiklelio ir dengiamojo lakšto, taikant tam tikrą slėgį, audinių ląstelės bus presuojamos paruošimo būdu.
(1) paimti medžiagą. Ląstelių dalijimosi stebėjimas, ląstelių dalijimasis kaip medžiaga turėtų būti parinktos vešlios, šviežios audinių ląstelės. Tokie kaip šaknų galiukai, stiebo galiukų meristeminis audinys, kaulų čiulpų ląstelės, dulkinės (žiedadulkių motininės ląstelės). Spermos lizdas (spermatogonija) ir pan.
(2) Fiksavimas. Medžiagos fiksavimas gali būti nustatomas pagal poreikį, iš karto po medžiagos slėgio filmo stebėjimo, negalima atlikti atskiro fiksuoto apdorojimo (ir sinchroninio dažymo); paimkite medžiagą ne iš karto po apžiūros, medžiagą galima fiksuoti fiksatoriumi (dažniausiai alkoholio acetato fiksatoriumi). Fiksuotas 2 ~ 24 valandas (priklausomai nuo medžiagos) po plovimo 95 % etanoliu, konservuotas 70 % etanolyje, budėjimo režimas.
(3) Disociacija. Ląstelėms nėra lengva išsklaidyti medžiagą naudojant hidrolizės atskyrimo tirpalą (pvz., 1N HCl arba druskos rūgštį arba alkoholio tirpalą), bendras apdorojimas 6–20 min., po disociacijos ir skalavimas vandeniu prieš dažymą.
(4) Dažymas. Yra daug rūšių dėmių. Chromosomų stebėjimas dažniausiai naudojamas dažymui purpurinės acetato dažymo tirpalu.
(5) Plėvelės presavimas. Padėkite medžiagą ant stiklelio, įlašinkite lašelį vandens arba beicavimo tirpalo, uždenkite dengiamąjį stiklelį ir nykščiu švelniai paspauskite stiklelį.
(6) Stebėjimas. Paspaudus plėvelę, ją galima stebėti po mikroskopu.
