Su konfokaline fluorescencine mikroskopija susijusios žinios
Pagrindinis konfokalinės fluorescencinės mikroskopijos principas yra taškinio šviesos šaltinio naudojimas mėginiui apšvitinti, suformuojant tiksliai apibrėžtą mažą dėmę židinio plokštumoje. Dėmės skleidžiama fluorescencija po švitinimo surenkama objektyvo ir siunčiama atgal į spektrofotometrą, sudarytą iš dvikrypčio spalvoto veidrodžio, palei pradinį švitinimo kelią. Spektrofotometras siunčia fluorescenciją tiesiai į detektorių. Priešais šviesos šaltinį ir detektorių yra dvi skylutės, atitinkamai vadinamos apšvietimo smeigtukais ir aptikimo skylutėmis. Geometriniai abiejų matmenys yra vienodi, apie 100-200nm; Palyginti su šviesos tašku židinio plokštumoje, jie abu yra sujungti, o tai reiškia, kad šviesos taškas praeina per lęšių seriją ir galiausiai gali vienu metu sufokusuoti ir apšvietimo skylutę, ir aptikimo skylutę. Tokiu būdu šviesa iš židinio plokštumos gali susilieti aptikimo angos diapazone, o išsklaidyta šviesa iš viršaus arba žemiau židinio plokštumos yra užblokuota už aptikimo angos ir negali būti vaizduojama. Lazeriu nuskaitydamas mėginį taškas po taško, fotodaugintuvo vamzdelis, aptikęs skylutę, taip pat gauna atitinkamą konfokalinį šviesos taško vaizdą, kuris paverčiamas skaitmeniniu signalu ir perduodamas į kompiuterį. Galiausiai ekrane susintetinamas aiškus visos židinio plokštumos konfokalinis vaizdas.
Kiekvienas židinio plokštumos vaizdas iš tikrųjų yra optinis bandinio skerspjūvis, kuris visada turi tam tikrą storį, taip pat žinomą kaip optinis plonas pjūvis. Dėl to, kad šviesos intensyvumas židinio taške yra daug didesnis nei ne židinio taške, o ne židinio plokštumos šviesa išfiltruojama skylutėmis, konfokalinės sistemos lauko gylis yra apytiksliai lygus nuliui. Nuskaitant pagal Z ašies kryptį galima pasiekti optinę tomografiją, suformuojant dvimatį optinį pjūvį stebimo mėginio židinio vietoje. XY plokštumos (židinio plokštumos) skenavimą derinant su Z ašies (optinės ašies) skenavimu, kaupiant ištisinius dvimačių vaizdų sluoksnius ir apdorojant juos specializuota kompiuterine programine įranga galima gauti trimatį mėginio vaizdą.
Aptikimo skylutė ir šviesos šaltinio skylutė visada sufokusuotos į tą patį tašką, todėl fluorescencija, sužadinta už fokusavimo plokštumos, negali patekti į aptikimo angą.
Paprasta lazerinės konfokalinės mikroskopijos veikimo principo išraiška yra ta, kad jis naudoja lazerį kaip šviesos šaltinį ir prideda lazerinį nuskaitymo įrenginį bei konjuguotą fokusavimo įrenginį, pagrįstą tradiciniu fluorescencinės mikroskopijos vaizdavimu. Tai kompiuteriu valdoma sistema, skirta skaitmeniniams vaizdams gauti ir apdoroti.
