Lazerinio skenavimo daugiafotoninės mikroskopijos pranašumai
Lazerinė skenavimo daugiafotoninė mikroskopija yra didelė optinės mikroskopijos pažanga. Tai leidžia stebėti giliąsias gyvų ląstelių struktūras, fiksuotas ląsteles ir audinius, tuo pačiu fiksuojant aiškias ir ryškias daugiasluoksnes Z plokštumos struktūras, būtent optines dalis, kurios gali būti toliau naudojamos rekonstruojant trimatę kietą mėginių struktūrą.
Konfokalinis mikroskopas naudoja lazerio šviesos šaltinį. Lazerio spindulys išplečiamas, kad visiškai apšviestų objektyvo lęšio galinę židinio plokštumą, tada praeina per objektyvo lęšių sistemą ir susilieja į itin mažą tašką bandinio židinio plokštumoje. Priklausomai nuo objektyvo objektyvo skaitmeninės diafragmos, apšviestos dėmės skersmuo svyruoja maždaug nuo 0,25 iki 0,8 μm, o ašinis gylis yra apie 0,5–1,5 μm. Konfokalinės dėmės dydį lemia mikroskopo konstrukcija, lazerio bangos ilgis, objektyvo charakteristikos, nuskaitymo įrenginio nustatymai ir mėginio savybės.
Plataus lauko mikroskopai pasižymi dideliu apšvietimo diapazonu ir giliu apšvietimo gyliu, o konfokalinė mikroskopija koncentruoja apšvietimą į tikslų židinio tašką židinio plokštumoje. Pagrindinis konfokalinės mikroskopijos pranašumas yra galimybė atlikti ploną optinį storio fluorescencinių mėginių pjūvį (iki 50 μm ar daugiau), kurių kiekvienos sekcijos storis svyruoja nuo 0,5 iki 1,5 μm.
Optinių pjūvių vaizdų serija gaunama perkeliant bandinį vertikaliai per tikslų mikroskopo Z ašies žingsninį variklį. Vaizdo signalų rinkimas yra griežtai apribotas tiksline židinio plokštuma ir be trikdžių signalų, kylančių iš kitų mėginio vietų. Pašalinus fono fluorescenciją ir pagerinus signalo ir triukšmo santykį, konfokaliniai vaizdai rodo žymiai didesnį kontrastą ir skiriamąją gebą, palyginti su tradiciniais plataus lauko fluorescenciniais vaizdais.
Daugumoje egzempliorių sudėtingi konstrukciniai komponentai persipina, sudarydami sudėtingas sistemas. Surinkus pakankamą skaičių optinių sekcijų, trimatę rekonstrukciją galima užbaigti naudojant profesionalią programinę įrangą. Šis eksperimentinis metodas buvo plačiai taikomas biologiniuose tyrimuose, siekiant išsiaiškinti sudėtingus struktūrinius ir funkcinius ryšius tarp ląstelių ir audinių.
