Patobulinti lazerinės skenuojančios daugiafotonės mikroskopijos pranašumai
Lazerinė skenuojanti daugiafotoninė mikroskopija yra pagrindinis optinės mikroskopijos patobulinimas, daugiausia skirtas gyvų ląstelių, fiksuotų ląstelių ir audinių giliajai struktūrai stebėti ir gali gauti aiškias ir ryškias daugiasluoksnes Z plokštumos struktūras, ty optinius pjūvius, ir gali sukurti Trimatė kieta bandinio struktūra. Konfokaliniame mikroskope naudojamas lazerinis šviesos šaltinis, kuris išplečiamas, kad užpildytų visą objektyvo lęšio galinę židinio plokštumą, o po to per objektyvo lęšio lęšių sistemą susilieja į labai mažą bandinio židinio plokštumos tašką. Priklausomai nuo objektyvo objektyvo skaitmeninės diafragmos, ryškiausio apšvietimo taško skersmuo yra apie 0,25 ~ 0,8 μm, o gylis yra apie 0,5 ~ 1,5 μm. Konfokalinės dėmės dydis priklauso nuo mikroskopo konstrukcijos, lazerio bangos ilgio, objektyvo ypatybių, nuskaitymo įrenginio būsenos nustatymo ir mėginio pobūdžio. Lauko mikroskopai turi didelį apšvietimo diapazoną ir didelį apšvietimo gylį, o konfokaliniai mikroskopai turi apšvietimą, kuris yra sutelktas židinio plokštumos židinio taške. Pagrindinis konfokalinės mikroskopijos pranašumas yra tas, kad ja galima tiksliai optiškai atpjauti storus fluorescencinius mėginius (iki 50 μm ar daugiau), kurių storis yra apie 0,5–1,5 μm. Optinių pjūvių vaizdų seriją galima gauti judinant bandinį aukštyn ir žemyn naudojant mikroskopo Z ašies žingsninį variklį. Vaizdo informacijos gavimas yra valdomas plokštumoje ir jam netrukdys signalai iš kitų bandinio vietų. Pašalinus fono fluorescencijos poveikį ir padidinus signalo ir triukšmo santykį, konfokalinių vaizdų kontrastas ir skiriamoji geba žymiai pagerėja, palyginti su tradiciniais lauko apšvietimo fluorescenciniais vaizdais. Daugelyje egzempliorių daug sudėtingų struktūrinių komponentų yra susipynę, kad sudarytų sudėtingas sistemas, tačiau kai tik bus surinkta pakankamai optinių sekcijų, galime jas atkurti 3D formatu naudodami programinę įrangą. Šis eksperimentinis metodas buvo plačiai naudojamas biologiniuose tyrimuose, siekiant išsiaiškinti sudėtingus struktūrinius ir funkcinius ryšius tarp ląstelių ar audinių.
