Kaip pasirinkti tinkamą fluorescencinį mikroskopą
Fluorescencinis mikroskopas yra standartinė mikroskopinio vaizdo gavimo įranga laboratorijose ir patologijos skyriuose, naudojanti fluorescencines charakteristikas stebėjimui ir vaizdavimui. Jis plačiai naudojamas įvairiose srityse, tokiose kaip ląstelių biologija, neurobiologija, botanika, mikrobiologija, patologija, genetika ir kt. Fluorescencinis vaizdas pasižymi dideliu jautrumu ir specifiškumu, todėl labai tinka konkrečių baltymų, organelių ir kt. pasiskirstymui stebėti. audiniuose ir ląstelėse, tiriant bendrą lokalizaciją ir sąveiką, stebint gyvybės dinaminius procesus, tokius kaip jonų koncentracijos pokyčiai ir pan.
Mikroskopų pasirinkimas
Fluorescenciniai mikroskopai daugiausia skirstomi į tris kategorijas: vertikalieji fluorescenciniai mikroskopai (tinkami pjaustyti), atvirkštiniai fluorescenciniai mikroskopai (tinkami gyvoms ląstelėms ir pjaustymui) ir stereofluorescenciniai mikroskopai (tinkami didesniems egzemplioriams, tokiems kaip augalai, zebrafish (suaugusiems/suaugusiems). embrioniniai), medaka, pelės / žiurkės organai ir kt.).
Fluorescencinių filtrų blokų parinkimas
Renkantis filtrų blokus, reikia atsižvelgti ne tik į fluorescencinių zondų sužadinimo ir emisijos bangos ilgį, bet ir atsižvelgti į tai, ar yra nespecifinio sužadinimo ir ar yra spalvų skersinio pokalbio įvairiomis spalvomis pažymėtuose mėginiuose. Eksperimente sužadinimui parinksime kuo arčiausiai sužadinimo smailės esantį bangos ilgį, o priėmimo diapazonas turėtų apimti didžiausią emisiją. Alexa Fluor 488 sužadinimo smailė yra 500 nm, o fluorescenciniame mikroskope galima pasirinkti 480/40 sužadinimo filtrą. Dažniausiai fluorescencinėje mikroskopijoje naudojamus fluorescencinių filtrų blokus galima suskirstyti į du tipus: ilgo pralaidumo (LP) ir juostos pralaidumo (BP), kuriuos taip pat reikia parinkti pagal poreikius.
Konfokalinis mikroskopas
Atliekant tradicinius fluorescencinės mikroskopijos stebėjimus, dėl fluorescenciniu būdu pažymėtų medžiagų ir spontaniškų fluorescencinių struktūrų persidengimo jos yra tvirtai sujungtos. Tačiau tradiciniai krintančios fluorescencinės mikroskopijos objektyvai ne tik renka šviesą iš židinio plokštumos, bet ir išsklaido šviesą židinio plokštuma aukštyn ir žemyn, todėl labai sumažėja vaizdo skiriamoji geba ir kontrastas.
Konfokalinis vaizdavimas aptinka tik šviesą, atsispindinčią nuo savaiminio fokusavimo plokštumos, taip išsprendžiant pirmiau minėtą problemą. Šviesos šaltinis židinio plokštumoje per skylutę sudaro mažą ir smulkią dėmę, o iš židinio plokštumos skleidžiama šviesa surenkama per objektyvo lęšį. Didžioji fluorescencijos dalis, skleidžiama iš taškų, esančių aukščiau arba žemiau objektyvo lęšio židinio plokštumos, negali susilieti su skylute. Tik židinio plokštumoje esanti fluorescencija ir nedidelė nefokusuotos fluorescencijos dalis gali praeiti pro skylutę, o šviesos spindulys, esantis už židinio plokštumos, susilieja priešais arba už skylutės plokštės ir yra užblokuotas, kad nepatektų į detektorių per skylutę. Aptiktas vaizdas yra iš židinio plokštumos, todėl galutinė vaizdo kokybė labai pagerėja.
Dėl įvairių lazerinio skenavimo konfokalinės mikroskopijos privalumų ir praktiškumo šiuo metu ji yra nepakeičiamas eksperimentinis asistentas didelio tikslumo ląstelių biologijos, botanikos ir ląstelių tyrimų srityse. Kartu būsimuose mokslinių tyrimų centruose tai bus pati pagrindinė ir pagrindinė tyrimo priemonė.
