Kuo fluorescencinė mikroskopija skiriasi nuo lazerinės konfokalinės mikroskopijos
Fluorescencinis mikroskopas
1, fluorescencinis mikroskopas turi naudoti ultravioletinę šviesą kaip šviesos šaltinį, naudojamą apšvitinti tiriamą objektą, kad jis skleistų fluorescenciją, o tada stebėti objekto formą ir jo vietą po mikroskopu. Fluorescencinis mikroskopas naudojamas tiriant cheminių medžiagų absorbciją, transportavimą, pasiskirstymą ir lokalizaciją ląstelėse. Kai kurios ląstelėje esančios medžiagos, pavyzdžiui, chlorofilas, gali fluorescuoti po apšvitinimo ultravioletiniais spinduliais; yra medžiagų, kurios negali fluorescuoti pačios, bet nudažytos fluorescenciniais dažais ar fluorescuojančiais antikūnais, gali fluorescuoti ir apšvitinus ultravioletiniais spinduliais, o fluorescencinė mikroskopija yra viena iš priemonių kokybiniams ir kiekybiniams tokio pobūdžio medžiagų tyrimams.
2, fluorescencinio mikroskopo principas:
(A) šviesos šaltinis: šviesos šaltinis spinduliuoja įvairaus ilgio šviesą (nuo ultravioletinių iki infraraudonųjų spindulių).
(B) sužadinimo filtro šaltinis: per bandinį galima sukurti tam tikro šviesos bangos ilgio fluorescenciją, tuo pačiu blokuojant fluorescencijos nenaudingos šviesos sužadinimą.
(C) Fluorescencinis mėginys: paprastai nudažytas fluorochromu.
(D) Blokuojantys filtrai: blokuoja sužadinimo šviesą, kurios nesugeria bandinys, kad būtų galima pasirinktinai perduoti fluorescenciją, o kai kurie fluorescencijos bangos ilgiai taip pat yra selektyviai perduodami. Mikroskopas, kuris naudoja ultravioletinę šviesą kaip šviesos šaltinį, kad apšvitintas objektas fluorescuotų. Elektroninis mikroskopas pirmą kartą buvo surinktas 1931 m. Berlyne, Vokietijoje, Knorr ir Haroska. Šis mikroskopas vietoj šviesos pluošto naudoja greitaeigį elektronų pluoštą. Kadangi elektronų srauto bangos ilgis yra daug trumpesnis nei šviesos bangos, todėl elektroninio mikroskopo padidinimas gali būti iki 800,000 kartų, minimalios 0,2 nanometro ribos skiriamoji geba . 1963 m. pradėtas naudoti skenuojantis elektroninis mikroskopas, kurį galima pamatyti ant mažos objekto struktūros paviršiaus.
3, taikymo sritis: naudojama norint padidinti mažų objektų vaizdą. Paprastai naudojamas biologijoje, medicinoje, mikroskopinėse dalelėse ir kituose stebėjimuose.
Konfokalinis mikroskopas
1, konfokalinis mikroskopas atsispindinčioje šviesoje ant kelio ir pusiau atspindintis pusiau lęšis, pro atspindėtos šviesos lęšį, sulankstytą kitomis kryptimis, fokusuojamas ant pertvaros su skylute, skylė yra židinys, už pertvaros yra fotodaugiklio vamzdis. Galima įsivaizduoti, kad atsispindėjusi šviesa prieš ir po detektoriaus šviesos židinio taško per šį konfokalinės sistemos rinkinį negalės sufokusuoti mažos skylės, bus užblokuota pertvaros. Taigi fotometras matuoja atspindėtos šviesos intensyvumą židinio taške.
2 principas: tradicinis optinis mikroskopas naudoja lauko šviesos šaltinį, kiekvieno bandinio taško vaizdą trikdys šviesos difrakcija arba sklaida iš gretimų taškų; lazerinis skenuojantis konfokalinis mikroskopas naudoja lazerio spindulį per apšviečiančią angą, kad ant bandinio suformuotų taškinį šviesos šaltinį kiekvieno mėginio taško nuskaitymo židinio plokštumoje, mėginys apšvitinamas, kad būtų aptikta smeigtuko skylutė vaizdavimo metu. , taškas po taško arba taškas po taško arba taškas po taško aptikus skylutę po fotodaugintuvo vamzdžiu (PMT) arba šalto elektros movos įtaisu (cCCD), šviesos intensyvumas matuojamas fotometru. cCCD) priima tašką po taško arba eilutę po eilutės ir greitai sukuria fluorescencinį vaizdą kompiuterio monitoriaus ekrane. Apšvietimo smeigtuko skylutė ir aptikimo skylutė objektyvo lęšio židinio plokštumos atžvilgiu yra sujungtos, židinio plokštumos taškas tuo pačiu metu fokusuojamas į apšvietimo smeigtuko skylutę ir spinduliavimo skylutę, taškas, esantis už židinio plokštumos, nebus aptikimo smeigtuko skylėje vaizdavimas, kad konfokalinis vaizdas būtų optinio skerspjūvio pavyzdys, pašalinantis įprastų mikroskopų neryškių vaizdų trūkumus.
3, Taikymo sritys: medicina, gyvūnų ir augalų tyrimai, biochemija, bakteriologija, ląstelių biologija, audinių embriologija, maisto mokslas, genetika, farmakologija, fiziologija, optika, patologija, botanika, neuromokslai, jūrų biologija, medžiagų mokslas, elektronikos mokslas, mechanika, naftos geologija, mineralogija.
