Fluorescencinės mikroskopijos principai ir struktūros ypatumai
Fluorescencinė mikroskopija – tai didelio taško liuminescencijos efektyvumo panaudojimas, filtruojant spalvų sistemą, siekiant išspinduliuoti tam tikro bangos ilgio šviesą (pvz., ultravioletinius spindulius 3650 į šviesą arba violetinę-mėlyną 4200 į šviesą) kaip sužadinimo šviesą, sužadinimą. fluorescencinė medžiaga bandinyje skleidžia įvairių spalvų fluorescenciją, o tada padidinama per objektyvą ir okuliarus, kad būtų galima stebėti. Tokiu būdu stipraus kontrasto fone, net jei fluorescencija yra labai silpna, ją lengva atpažinti, didelis jautrumas, daugiausia naudojamas ląstelių struktūrai ir funkcijoms bei cheminei sudėčiai tirti. Pagrindinę fluorescencinio mikroskopo struktūrą sudaro įprastas optinis mikroskopas ir kai kurie priedai (pvz., fluorescencinis šviesos šaltinis, sužadinimo filtrai, dviejų spalvų pluošto separatorius ir blokuojantys filtrai ir kt.). Fluorescencinis šviesos šaltinis – dažniausiai naudojama itin aukšto slėgio gyvsidabrio lempa (50-200W), kuri gali skleisti įvairaus ilgio šviesą, tačiau kiekviena fluorescencinė medžiaga turi stipriausią fluorescencinės sužadinimo bangos ilgį, todėl reikia pridėti sužadinimo filtrus (paprastai ultravioletinis, violetinis, mėlynas ir žalias sužadinimo filtras), kad tik tam tikras sužadinimo šviesos bangos ilgis būtų apšvitintas bandiniais, o kita šviesa būtų absorbuojama. Taigi būtina pridėti sužadinimo filtrą (dažniausiai ultravioletinius, violetinius, mėlynus ir žalius sužadinimo filtrus), kad per bandinį tik tam tikro bangos ilgio sužadinimo šviesa, o kita šviesa būtų sugerta. Kai kiekviena medžiaga yra apšvitinama sužadinimo šviesa, ji per labai trumpą laiką skleidžia matomą ilgesnio bangos ilgio fluorescenciją nei apšvitinta šviesa. Fluorescencija yra specifiška, paprastai silpnesnė nei sužadinimo šviesa, kad būtų galima stebėti specifinę fluorescenciją, reikia pasirinkti objektyvo lęšį, kuriam reikia pridėti blokavimo (arba slopinimo).
Fluorescencinio mikroskopo ir paprasto mikroskopo skirtumas
1. Apšvietimo metodas dažniausiai yra krentantis, tai yra, šviesos šaltinis projektuojamas ant mėginio per objektyvo lęšį;
2. Šviesos šaltinis yra ultravioletinė šviesa, trumpesnio bangos ilgio ir didesnės skiriamosios gebos nei įprasti mikroskopai;
3. Yra du specialūs filtrai, priešais šviesos šaltinį esantis naudojamas matomai šviesai filtruoti, o esantis tarp okuliaro ir objektyvo – ultravioletiniams spinduliams filtruoti, siekiant apsaugoti žmogaus akį.
Fluorescencinis mikroskopas taip pat yra savotiškas optinis mikroskopas, pagrindinis skirtumas yra tas, kad jų dviejų sužadinimo bangos ilgis skiriasi. Tai lemia fluorescencinio mikroskopo ir įprasto optinio mikroskopo struktūrą bei skirtingų metodų naudojimą.
Fluorescencinis mikroskopas yra pagrindinis imunofluorescencinės citochemijos įrankis. Jį sudaro šviesos šaltinis, filtro plokščių sistema ir optinė sistema bei kiti pagrindiniai komponentai. Jis naudoja tam tikrą šviesos bangos ilgį, kad paskatintų mėginį skleisti fluorescenciją, kuri padidinama per objektyvo lęšį ir okuliaro sistemą, kad būtų galima stebėti mėginio fluorescencinį vaizdą.
