Fluorescencinės mikroskopijos aptikimo metodas
fluorescencinis mikroskopas
Fluorescencinė mikroskopija yra pagrindinė imunofluorescencinės citochemijos priemonė. Jį sudaro pagrindiniai komponentai, tokie kaip šviesos šaltinis, filtro plokštelių sistema ir optinė sistema. Jis naudoja tam tikrą šviesos bangos ilgį bandiniui sužadinti ir skleidžia fluorescenciją, kuri padidinama per objektyvą ir okuliaro sistemą, kad būtų galima stebėti bandinio fluorescencinį vaizdą (1 pav.).
(1) Šviesos šaltinis
Šiais laikais kaip šviesos šaltinis dažniausiai naudojama 200 W itin aukšto slėgio gyvsidabrio lempa. Jis pagamintas iš kvarcinio stiklo, kurio viduryje yra sferinė forma, o viduje užpildytas tam tikras gyvsidabrio kiekis. Veikimo metu dėl išlydžio tarp dviejų elektrodų gyvsidabris išgaruoja, o slėgis sferos viduje sparčiai didėja. Kai gyvsidabris visiškai išgaruoja, jis gali pasiekti 50-70 standartinį atmosferos slėgį, o tai paprastai trunka apie 5-15 minutes. Itin aukšto slėgio gyvsidabrio lempų liuminescencija yra išlydžio tarp elektrodų rezultatas, kuris nuolat disocijuoja ir sumažina gyvsidabrio molekules bei skleidžia fotonus. Skleidžia stiprią ultravioletinę ir mėlynai violetinę šviesą, kurios pakanka įvairioms fluorescencinėms medžiagoms sužadinti, todėl plačiai naudojamas fluorescenciniuose mikroskopuose.
Atsargumo priemonės naudojant fluorescencinį mikroskopą
(1) Griežtai laikykitės fluorescencinio mikroskopo gamyklos nurodymų ir nekeiskite programos savavališkai.
(2) Patikra turi būti atliekama tamsioje patalpoje. Įėję į tamsų kambarį, prijunkite maitinimą ir 5-15 min. uždegkite itin aukšto slėgio gyvsidabrio lempą. Šviesos šaltiniui skleidžiant stiprią šviesą ir stabilizavus, akys turi visiškai prisitaikyti prie tamsios patalpos, prieš pradėdamos stebėti mėginį.
(3) Siekiant išvengti UV žalos akims, reguliuojant šviesos šaltinį reikia dėvėti apsauginius akinius.
(4) Patikrinimo laikas kiekvieną kartą turėtų būti 1-2 val. Jei jis viršija 90 minučių, itin aukšto slėgio gyvsidabrio lempos šviesos intensyvumas palaipsniui mažėja, o fluorescencija silpnėja; Mėginiai buvo veikiami ultravioletinių spindulių 3-5 dienų
Po min fluorescencija taip pat žymiai sumažėjo; Taigi maksimali trukmė neturi viršyti 2-3 val.
(5) Fluorescencinio mikroskopo šviesos šaltinio eksploatavimo trukmė yra ribota, todėl mėginys turi būti tiriamas centralizuotai, kad būtų sutaupyta laiko.
Sutaupykite laiko ir apsaugokite šviesos šaltinį. Kai oras karštas, reikia įdėti elektrinį ventiliatorių, kuris išsklaidytų šilumą ir atvėstų. Keičiant naują lemputę, naudojimo laikas turi būti fiksuojamas nuo pat pradžių. Kai lemputė išjungta ir vėl norite ją naudoti, prieš uždegdami turite palaukti, kol lemputė pakankamai atvės. Venkite uždegti šviesos šaltinį kelis kartus per dieną.
(6) Stebėkite mėginį iškart po dažymo, nes laikui bėgant fluorescencija palaipsniui silpnės. Jei mėginys laikomas polietileniniame plastikiniame maišelyje 4 laipsnių temperatūroje, gali sulėtėti fluorescencijos susilpnėjimo laikas ir neleisti išgaruoti tvirtinimo medžiagai.
(7) Fluorescencijos ryškumo vertinimo kriterijai paprastai skirstomi į keturis lygius, ty "vienas" – fluorescencija nėra arba matoma silpna. „+“ – matoma tik matoma fluorescencija. ++- Matoma su ryškia fluorescencija. „+++“ – matoma ir akinanti fluorescencija.
