Fluorescencinio mikroskopo naudojimo metodai ir atsargumo priemonės
Naudojimo būdas:
(1) Padėkite medžiagos lakštą ant laikiklio.
(2) Įjunkite fluorescencinio mikroskopo įtampos reguliatorių. Tada paspauskite paleidimo grupę, kad užsidegtumėte, UV lempa neturi būti išjungta 15 minučių ir neįsijungiama iš naujo 3 minutes po jos išjungimo.
(3) Sužadinimo filtrą pasukite į v, dichroinę plėvelę į v, pasirinkite 495 arba 475 nm blokuojantį filtrą.
(4) Pasirinkite uvFL40, uvFL100 fluorescenciją priimančią objektyvo mikroskopiją.
(5) Ant stiklelio įpilkite nefluorescencinės alyvos, pirmiausia 40 x, o paskui 100 x fokusavimo mikroskopu. Rodyti fluorescenciją.
(7) Kadangi fluorescencinė medžiaga, veikiant ultravioletiniams spinduliams ir didėjant fluorescencijai, laikui bėgant palaipsniui susilpnėjo, todėl mikroskopinis tyrimas turėtų būti dažnai keičiamas regėjimo lauke.
(8) taip pat galima naudoti uvFL10 arba uvFL20 mažo didinimo mikroskopinę medžiagą (su mažu didinimu, nepridedant nefluorescencinės alyvos).
Fluorescencinio vaizdo įrašymo būdas:
Fluorescencinis vaizdas matomas fluorescenciniu mikroskopu, vienas yra su morfologinėmis charakteristikomis, antrasis yra su fluorescencijos spalva ir ryškumu, sprendžiant rezultatus, abu turi būti derinami su išsamiu sprendimu. Rezultatai fiksuojami pagal subjektyvius rodiklius, ty darbuotojo vizualiai stebint. Kaip bendras kokybinis stebėjimas, iš esmės patikimas. Tobulėjant technologijoms ir mokslui, įvairiais laipsniais naudojami objektyvūs vertinimo rezultatams fiksuoti rodikliai, pavyzdžiui, ląstelių spektrofotometro, vaizdo analizatoriaus ir kitų instrumentų naudojimas. Tačiau šiais instrumentais užfiksuoti rezultatai taip pat turi būti derinami su subjektyviu vertinimu.
Fluorescencinio mikroskopinio fotografavimo technologija labai reikalinga fluorescenciniams vaizdams įrašyti, nes fluorescencija lengvai išblunka ir susilpnėja, kad akimirksniu būtų užfiksuoti fotografavimo rezultatai. Metodas iš esmės yra toks pat kaip įprastos mikrografijos. Tiesiog reikia naudoti didelės spartos fotografinę juostą, pvz., ASA200 aukščiau arba 24. aukštesnę. Kadangi ultravioletinė šviesa veikia fluorescencijos sprogimo efektą, pvz., FITC žymenis, ultravioletinių spindulių švitinimo 30s, fluorescencijos ryškumas sumažėjo 50%. Todėl ekspozicijos greitis yra per mažas, kad būtų galima užfiksuoti fluorescencinį vaizdą. Bendrųjų tyrimų fluorescenciniai mikroskopai turi pusiau automatinius arba visiškai automatinius mikrofotografavimo sistemos įrenginius.
Atsargumo priemonės:
(1) Dirbkite griežtai laikydamiesi fluorescencinio mikroskopo gamyklos vadovo reikalavimų, savavališkai nekeiskite procedūros.
(2) Patikra turėtų būti atliekama tamsioje patalpoje. Įėję į tamsią patalpą, prijunkite maitinimo šaltinį, uždegkite itin aukšto slėgio gyvsidabrio lempą 5-15min., palaukite, kol šviesos šaltinis skleis stiprią šviesą, kad stabilizuotųsi, o akys visiškai prisitaikys prie tamsios patalpos ir tada pradėkite stebėti pavyzdį.
(3) Siekiant išvengti ultravioletinių spindulių poveikio akims, reguliuojant šviesos šaltinį reikia dėvėti apsauginius akinius.
(4) kiekvieną kartą patikrinkite laiką iki 1 ~ 2h yra tinkamas, daugiau nei 90min, itin aukšto slėgio gyvsidabrio lempos šviesos intensyvumas palaipsniui mažėja, fluorescencija susilpnėjo; bandiniai apšvitinti ultravioletiniais spinduliais 3 ~ 5min, fluorescencija taip pat žymiai susilpnėja; todėl * turi būti ne daugiau kaip 2 ~ 3 val.
(5) fluorescencinio mikroskopo šviesos šaltinio tarnavimo laikas yra ribotas, mėginys turi būti tikrinamas centralizuotai, kad būtų sutaupytas laikas ir apsaugotas šviesos šaltinis. Kai karšta, reikia pridėti ventiliatoriaus aušinimą, naują lemputę fiksuoti nuo naudojimo pradžios. Kai lemputė užgęsta ir ją vėl norima naudoti, prieš uždegant lemputę reikia pakankamai atvėsinti. Šviesos šaltinio reikia vengti kelis kartus.
(6) Stebėkite mėginį iškart po dažymo, nes laikui bėgant fluorescencija palaipsniui mažės. Jei mėginys dedamas į polietileninį plastikinį maišelį, saugomą 4 laipsnių temperatūroje, tai gali uždelsti fluorescencijos susilpnėjimo laiką ir užkirsti kelią sandarinimo medžiagos išgaravimui.
(7) Fluorescencijos ryškumo vertinimo kriterijai: paprastai skirstomi į keturis lygius, ty „vienas“ – fluorescencija nėra arba matoma silpna. „+“ – tik aiškiai matoma fluorescencija. „+ +“ – matoma su ryškia spalva
