Biomikroskopija audinių blokų tūrio atžvilgiu
Biologinė mikroskopija Iki šiol fiksavimas šaltai, šaldytas itin plonas pjūvis ir džiovinimas šalčiu yra įprasti audinių ir ląstelių rentgeno mikropjūvių metodai. Šio metodo detalės paaiškinamos taip:
Biologiniuose mikroskopuose su kondensatoriumi kondensatorius gali būti judinamas aukštyn ir žemyn, kad šviesumas būtų vidutinis, o kintamos šviesos diafragma taip pat gali būti pakeista, kad būtų pasiektas vidutinis 9b ryškumas. Jei šviesa saulėta, kondensatorius gali būti atitinkamai pakeltas ir kintamo šviesos šaltinio diafragma gali būti atitinkamai padidinta. Jei šviesa per stipri, galima atitinkamai nuleisti kondensatoriaus lęšį ir atitinkamai sumažinti susikertančios šviesos diafragmą. Jei tokiu atveju vis tiek jaučiatės apakinti, galite pasirinkti tinkamą filtrą ir uždėti jį ant laikiklio po kondensatoriumi. Šis ąžuolas įgaus jus tenkinančio ryškumo. Žinoma, norint reguliuoti viršutinę ir apatinę kondensatoriaus padėtis, reguliuoti kintamo optinio rodmens diafragmos dydį ir parinkti tinkamą filtrą, reikia tam tikro laiko praktikos įgyti patirties.
Labai svarbi biologinės mikroskopijos problema yra ta, kad mėginių ėmimo ir ląstelių atskyrimo procese, po džiovinimo šalčiu ir dervos įterpimo (FD), užšaldžius itin plonus agregatus ir po džiovinimo šalčiu, kiekvienoje dalyje yra 65 elementai. turi būti tvarkomas atsargiai. Analizuojamos ląstelės negali būti pažeistos. Mat rentgeno mikroanalizė apima ne tik daugybę žingsnių, bet ir kainuoja nemažai. Jei analizuojamos ląstelės yra pažeistos arba negyvos ląstelės po ilgo ir kelių etapų apdorojimo, labai gaila padaryti klaidingas išvadas. Pavyzdžiui, kolagenazės būdu atskirti kardiomiocitai yra dviejų formų: vienas yra ilgo lazdelės formos, o kitas – apvalus. Pastarosios yra mirštančios ląstelės, kurios pažeidžiamos ląstelių išskyrimo metu.
Biomikroskopija Elektrolitų kiekis ir pasiskirstymas šių dviejų tipų ląstelėse yra gana skirtingi. Žiediniuose kardiomiocituose Na yra labai daug, o K labai mažai, o nematoduose ca koncentracija labai didelė. Patikrinus kitais analizės metodais, įrodyta, kad didelis Na ir mažas K apvaliose ląstelėse bei didelis Ca kiekis mitochondrijose atsiranda dėl ląstelės membranos pažeidimo ląstelių atskyrimo proceso metu. Ledo šalto ląstelių ir audinių fiksavimo metodas paprastai yra pirmiausia gesinimas ir fiksavimas, o tada jie laikomi skystame azote. Gesinanti fiksacija yra labai svarbi konservavimo efektui. Gyvose ląstelėse arba šviežiuose audiniuose gausu vandens. Gesinant dažnai pirmiausia užšaldomos ir fiksuojamos tos ląstelių ar audinių dalys, kurios tiesiogiai liečiasi su susmulkintu šaltnešiu (ypač gesinant skystu azotu), taip susidaro „apvalkalas“, kuris trukdo Ląstelių centrinės dalys susmulkinti ir šaltai fiksuoti. Todėl, atliekant X linijos mikrozonų analizę, dažnai nustatoma, kad didesnių ląstelių centre yra ledo kristalų. Kad taip neatsitiktų, medžiaga, kurios lydymosi temperatūra aukštesnė nei skysto azoto, bet žemesnė nei 806c, naudojama kaip skaldytas šaltnešis. Tokių medžiagų yra daug, tačiau pigiausias yra koncentruotas propanas (virimo temperatūra - 42,120c, lydymosi temperatūra - 187.10c, molekulinė masė 44,1), o aušinimo greitis yra didžiausias. Tačiau jo trūkumas yra tai, kad jis yra degus.
Biologinis mikroskopas gali padėti raumenų skaidulą ant specialaus stovo, kad, kai raumenų skaidulų susitraukimas pasiekia tam tikrą fazę ir ją reikia fiksuoti, nedelsiant paleiskite antgalį, kad purškiant skystą propaną į raumenų skaidulą, kad ji užgesintų ir fiksuotų. Tada raumenų skaidulos kartu su rėmu buvo išimtos ir patalpintos į skystą azotą. Jei fiksuojate kraujo ląsteles arba izoliuotas ląsteles, pirmiausia sukoncentruokite ląsteles centrifuguodami mažu greičiu, perkelkite ląsteles į sidabrinį buteliuką, turintį gerą šilumos laidumą, įdėkite buteliuką į skystą propaną ir užšaldykite fiksavimui. Fiksuojant žiurkės kasą Hall laboratorijoje, du plieniniai blokai buvo iš anksto atšaldyti skystu heliu (arba skystu azotu), o du variniai blokai buvo suspausti žnyplėmis ir dedami ant kasos priekinės ir galinės pusės, kad užgestų ir pritvirtintų. kasa. Audiniai arba ląstelės gali būti laikomos skystame azote, kad būtų galima ilgai laikyti po gesinimo ir fiksavimo.
Biologinė mikroskopija Be labiausiai gerbiamo šaldyto itin plono pjūvio metodo, čia yra dar vienas mokslininkų naudojamas nusodinimo metodas. Pridedama medžiaga, kad susidarytų nuosėdos su analizuojamu komponentu, kad ji būtų imobilizuota prieš analizę, tada nuosėdos analizuojamos. Pavyzdžiui, žmonės dažnai naudoja oksalatą ir piroantimonatą, kad nusodintų ca į raumenų ląsteles. Pirmasis nėra pakankamai jautrus mažai Ca koncentracijai citoplazmoje; piroantimonatas yra jautresnis ir smegenyse gali susidaryti elektronų tankių nuosėdų su laisvu Ca, tačiau piroantimonatas nesuderinamas su natriu, manganu, bariu, geležimi. Taip pat susidaro nuosėdos, kurios yra ne tokios specifinės. Mėginių paruošimo procesas yra panašus į įprastų transmisijos elektronų mikroskopo ultraplonų pjūvių bandinių paruošimą, skirtumas tas, kad 3 procentai kalio piroantimonato (fosfatinis buferinis tirpalas, pH 7,6) buvo fiksuojami 6 valandas prieš fiksavimą, o ant nudažytų raumenų itin plonų pjūvių, Juodos nuosėdos buvo pastebėtos kiekvieno sarkomero A ir 2 juostų vidurio linijose, o nedažytos sekcijos buvo naudojamos rentgeno mikroanalizei. Diaminobenzidino tetrahidrochloridas (DAB) buvo naudojamas hemo turinčioms medžiagoms nusodinti ir pan. Laboratorijose, kuriose nėra užšaldytų itin plonų pjūvių, galima apsvarstyti histocheminės nusodinimo reakcijos ir rentgeno mikrodiferenciacijos tilto derinį. Pusiau kiekybinis gali būti atliktas pagal analizuojamų elementų smailės aukštį
