Fluorescencinės bendrojo vidinio atspindžio fluorescencinės mikroskopijos taikymas
TIRFM (Total Internal Reflection Fluorescence Microscope), viso vidinio atspindžio fluorescencinis mikroskopas, kai šviesa patenka į žemesnio lūžio rodiklio terpę iš terpės su dideliu lūžio rodikliu, jei kritimo kampas pakankamai didelis, visa šviesa atsispindi be lūžio, bet Dviejų terpių sąsaja sukuria išnykstančias bangas, kurios gali sužadinti fluorescenciją 100 nm atstumu šalia sąsajos, kad būtų galima stebėti objekto paviršių. Sužadinimo šviesa gali būti siunčiama per įprasto fluorescencinio mikroskopo apšvietimą arba specialų šviestuvą, taip pat galima valdyti lazerio kritimo kampą. Momentinio lauko sužadinimo metodas naudojamas tam, kad sužadinimo šviesa nepatektų į detektorių. Sužadinimo šviesa, esanti stiklo ir vandens sąsajoje, sukuria visą vidinį atspindį. Dėl eksponentinio sužadinimo šviesos susilpnėjimo tik mėginio plotas, esantis labai arti viso atspindžio paviršiaus, sukels fluorescencinį atspindį, o tai labai sumažina fono šviesos triukšmo trukdžius stebėjimo taikiniui, todėl ši technologija yra plačiai naudojama atliekant dinaminį stebėjimą. ląstelių paviršiaus medžiagų.
Visiško vidinio atspindžio fluorescencinės mikroskopijos (TIRFM) schema
①Pavyzdys ②Bylančių bangų diapazonas ③Dengiamasis stiklas ④Alyvos panardinimas ⑤Taikinys ⑥Emisijos spindulys (signalas) ⑦Sužadinimo spindulys
Norint pasiekti visišką vidinį atspindį, reikalingas didelis kritimo kampas, pavyzdžiui, kritimo kampas stiklo ir vandens sąsajoje yra didesnis nei 61 laipsnis. Tai galima pasiekti naudojant prizmę, vadinamą prizmės pagrindu veikiančiu TIRFM, arba objektyvu su didele skaitmenine diafragma, kuris vadinamas objektyvo tipo TIRFM. Šiuo metu parduodami viso vidinio atspindžio fluorescenciniai mikroskopai paprastai yra objektyvo tipo, didelio greičio ir didelio tikslumo.
Visiško vidinio atspindžio fluorescencinė mikroskopija yra plačiai naudojama kai kuriuose biologiniuose laukuose, nes ji gali realizuoti fluorescencijos stebėjimą labai ploname diapazone (mažiau nei 100 nm) objektų paviršiuje. Pavyzdžiui, šios programos:
Ląstelių paviršiaus vaizdų stebėjimas: ląstelės membranos paviršiaus struktūra, ląstelės paviršiaus kontaktas, membranos paviršiaus dinamika/baltymų lokalizacija.
Vienos molekulės stebėjimas ir manipuliavimas: miozinas, aktinas ir Cy{1}}pažymėtas ATP.
Ląstelių membranos paviršiaus judėjimas: pvz., pūslelių įsiskverbimas, pūslelių iškvėpimas ir pūslelių egzokrininė. į
Kalcio kibirkščiavimo reiškinio stebėjimas ląstelės membranoje, jonų kanalų stebėjimas.
Molekuliniai motoriniai tyrimai: sukimosi varikliai, citoskeleto baltymai, polimerai, G baltymai, žiedo baltymai, nukleotidų varikliai.
Be biologijos srities, jis taip pat turi gerą pritaikymą chemijos srityje, stebint chemines molekulines struktūras.
