Transmisinės fluorescencinės mikroskopijos ir atspindžio fluorescencinės mikroskopijos skirtumai, pranašumai ir trūkumai
1. Perdavimo fluorescencinis mikroskopas: sužadinimo šviesos šaltinis perduodamas per bandinio medžiagą per kondensatorių, kad sužadintų fluorescenciją. Paprastai naudojami tamsaus lauko koncentratoriai arba įprasti koncentratoriai gali būti naudojami reflektoriui reguliuoti, kad sužadinimo šviesa ir šoninė šviesa būtų paverčiama bandiniu. Tai gana senamadiškas fluorescencinis mikroskopas. Jo pranašumas yra stipri fluorescencija esant mažam padidinimui, o trūkumas yra tas, kad jo fluorescencija silpnėja didėjant didinimui. Todėl geriau stebėti didesnes medžiagas.
2. Krintančio pluošto fluorescencinis mikroskopas: tai naujo tipo fluorescencinis mikroskopas, sukurtas šiais laikais. Skirtingai nuo ankstesnio, sužadinimo šviesa nukrenta nuo objektyvo ant bandinio paviršiaus, naudojant tą patį objektyvą kaip apšvietimo kondensatorių ir objektyvo lęšį fluorescencijai surinkti. Prie optinio kelio reikia pridėti dviejų spalvų pluošto separatorių, kuris sudaro 45 laipsnių kampą su fotouranu. Sužadinimo šviesa atsispindi objektyvo lęšyje ir susikaupia ant mėginio. Mėginio generuojama fluorescencija ir sužadinimo šviesa, atsispindėjusi nuo objektyvo lęšio ir dengiamojo stiklo paviršiaus, vienu metu patenka į objektyvo lęšį ir grįžta į dviejų spalvų pluošto separatorių, atskirdama sužadinimo šviesą ir fluorescenciją. Tada likusią sužadinimo šviesą sugeria blokuojantis filtras. Jei naudojami skirtingi sužadinimo filtrų, dviejų spalvų pluoštų separatorių ir blokuojančių filtrų deriniai, jie gali patenkinti skirtingų fluorescencinių reakcijos produktų poreikius. Šio fluorescencinio mikroskopo pranašumai yra vienodas matymo lauko apšvietimas, aiškus vaizdas ir stipresnė fluorescencija su didesniu padidinimu.
Perdavimo fluorescencinės mikroskopijos privalumai ir trūkumai
Šviesos šaltinis: aukšto slėgio gyvsidabrio lempa arba halogeninė lempa.
Prožektorių veidrodis: tamsaus lauko prožektorių naudojimas sužadinimui ir fluorescencijai atskirti.
Objektyvinis lęšis: galima naudoti bet kokio tipo objektyvą.
Mėginys: ploni mėginiai yra tinkamesni perdavimo stebėjimui.
Privalumai: ① Naudojant tamsaus lauko kondensatorių, sužadinimo šviesa negali patekti į objektyvo lęšį, todėl lengva suformuoti tamsų foną ir pasiekti gerą kontrastą, o stebėjimui galima naudoti bet kokį objektyvą. ② Naudojant mažo didinimo objektyvą, jis yra ryškesnis nei atspindintis fluorescencinis mikroskopas.
Trūkumas: Prožektoriaus centras ir aukštis turi būti tinkamai sureguliuoti, kitaip nepavyks gauti ryškaus fluorescencinio vaizdo. Dėl tamsaus lauko prožektorių židinio nuotolio apribojimo negalima naudoti storo stiklo skaidres. Regėjimo lauko apšvietimo plotas neturi būti per didelis, nes priešingu atveju fluorescencinio mėginio fluorescencinė spalva gali išblukti. Stori arba nepermatomi egzemplioriai netinka.
Atspindinčios fluorescencinės mikroskopijos privalumai ir trūkumai
Šviesos šaltinis: aukšto slėgio gyvsidabrio lempa arba halogeninė lempa.
Fokusavimo objektyvas: kadangi objektyvo objektyvas naudojamas kaip fokusavimo objektyvas, fokusavimo objektyvo nereikia.
Objektyvinis lęšis: naudojamas objektyvas turi sugebėti perduoti pakankamai ultravioletinės šviesos ir pats nesukelti fluorescencijos, neribojant skaitmeninės diafragmos.
Mėginys: galima stebėti ir storus, ir nepermatomus mėginius.
Privalumai: ① Kadangi objektyvas taip pat tarnauja kaip prožektorius, jo nereikia daug reguliuoti. ② Naudojant Kolar apšvietimo metodą, galima panaudoti diafragmos ir matymo lauko diafragmos poveikį. Objektyvo objektyvo skaitmeninė diafragma nėra ribojama, o didelės raiškos vaizdus taip pat galima gauti dideliu padidinimu. Taip pat galima naudoti ir storus dengiamuosius stiklelius. Kiti stebėjimo metodai taip pat gali būti derinami su atspindėta fluorescencija, ypač su fazių skirtumo metodu ir perdavimo diferencialinių trukdžių metodu. Taip galima išvengti nereikalingo fluorescencijos spalvos blukimo reiškinio.
Trūkumas: naudojant žemės padidinimo objektyvą, vaizdas yra gana tamsus, todėl reikia naudoti didelės skaitmeninės diafragmos objektyvą. Filtrų sistema turi veiksmingai atskirti sužadinimo liuminescenciją ir fluorescenciją.
