Koks mikroskopas naudojamas norint pamatyti mikrobų ląstelių formą
Bendras visų mažų organizmų, kuriuos žmonėms sunku stebėti plika akimi, terminas. Mikroorganizmai apima bakterijas, virusus, grybus ir keletą dumblių. (Tačiau kai kurie mikroorganizmai yra matomi plika akimi, pavyzdžiui, grybai, priklausantys grybams, Ganoderma lucidum ir kt.) Virusai yra „neląstelinių organizmų“, susidedančių iš kelių komponentų, tokių kaip nukleino rūgštys ir baltymai, tipas, tačiau jų išgyvenimas turi priklausyti nuo gyvų ląstelių. Pagal skirtingas egzistuojančias aplinkas jas galima suskirstyti į prokariotinius mikroorganizmus, kosminius mikroorganizmus, grybelinius mikroorganizmus, mielių mikroorganizmus, jūrinius mikroorganizmus ir kt.
Mikroorganizmų vaidmuo ir žala:
Vienas iš svarbiausių mikroorganizmų padarinių žmogui yra infekcinių ligų paplitimas. 50 procentų žmonių ligų sukelia virusai. Mikrobų, sukeliančių žmonių ligas, istorija yra nuolatinės žmonių kovos su jais istorija. Žmonės padarė didelę pažangą ligų prevencijos ir gydymo srityse, tačiau ir toliau atsiranda naujų ir pasikartojančių mikrobinių infekcijų, pavyzdžiui, daug virusinių ligų, kurioms trūksta veiksmingų gydomųjų vaistų. Kai kurių ligų patogeninis mechanizmas nėra aiškus. Piktnaudžiavimas daugybe plataus veikimo spektro antibiotikų sukėlė stiprų atrankos spaudimą, todėl daugelis padermių mutavo, todėl atsirado atsparumas vaistams, o žmonių sveikatai gresia naujos grėsmės. Kai kurie segmentuoti virusai gali mutuoti rekombinacijos ar perskirstymo būdu. Tipiškiausias pavyzdys yra gripo virusas.
Sužinojęs konkretų mikroorganizmų apibrėžimą, kokio tipo mikroskopą eksperimentuotojas turėtų naudoti tirdamas mikroorganizmus, kad pamatytų, o kokį mikroskopą galima naudoti norint geriau matyti, stebėti ir analizuoti įprastas mikrobų formas.
Mikroskopo išradimas – matyti besišypsančius objektus, kurių nematyti plika akimi. Mikroorganizmų dydis yra labai mažas, todėl juos reikia didinti ir stebėti mikroskopo pagalba. Be to, yra daugybė mikroorganizmų tipų, todėl iš esmės dauguma optinių mikroskopų gali Norint stebėti mikroorganizmus, kitas klausimas – kokio tipo mikroskopą reikėtų naudoti mikroorganizmų stebėjimui ir analizei. Įprasti mikroskopai, skirti mikrobų morfologijai stebėti, yra biologiniai mikroskopai, fazinio kontrasto mikroskopai, apverstieji mikroskopai, fluorescenciniai mikroskopai ir konfokaliniai mikroskopai. Mikroskopas ir pan.
Toliau aprašomi įvairūs mikroskopai, naudojami mikroorganizmams stebėti:
1. Paprastas šviesos mikroskopas
Natūrali šviesa arba šviesa naudojama kaip šviesos šaltinis, o jos bangos ilgis yra apie {{0}},4 μm. Mikroskopo skiriamoji geba yra pusė bangos ilgio, tai yra 0,2 μm, o mažiausias plika akimi matomas vaizdas yra 0,2 mm. Todėl naudojant aliejinį (imersinį) veidrodį padidinant 1000 kartų, 0,2 μm dalelės gali padidėti iki 0,2 mm, matomos plika akimi. Bakterijų, aktinomicetų ir grybelių stebėjimui gali būti naudojami įprasti optiniai mikroskopai.
2. Tamsaus lauko mikroskopija dažniausiai naudojama nedažytų mikrobų morfologijai ir judėjimui stebėti. Įdiegus tamsaus lauko kondensatorių įprastame mikroskope, šviesa negali prasiskverbti tiesiai iš vidurio, o matymo laukas yra tamsus. Kai mėginys gauna įstrižą šviesą nuo kondensatoriaus krašto, jis gali būti išsklaidytas, todėl tamsiame lauko fone galima stebėti ryškius mikroorganizmus, tokius kaip bakterijos ar spirochetos.
3. Fazinio kontrasto mikroskopas Fazinio kontrasto mikroskopas naudoja fazių skirtumo plokštės šviesos efektą, kad pakeistų tiesioginės šviesos šviesos fazę ir amplitudę, o šviesos fazės skirtumą paverstų šviesos intensyvumo skirtumu. Fazinio kontrasto mikroskopu, kai šviesa praeina pro nedažytą bandinį, šviesos fazės skirtumą lemia skirtingų bandinio dalių tankio nenuoseklumas, galima stebėti mikroorganizmų morfologiją, vidinę struktūrą ir judėjimo režimą.
4. Fluorescencinis mikroskopas Fluorescencinis mikroskopas iš esmės yra toks pat kaip įprastas optinis mikroskopas, pagrindinis skirtumas yra šviesos šaltinis, filtras ir kondensatorius. Šiuo metu dauguma jų naudoja epi-light prietaisus, o kaip šviesos šaltiniai dažniausiai naudojamos aukšto slėgio gyvsidabrio lempos, galinčios skleisti ultravioletinę arba mėlynai violetinę šviesą. Yra dviejų tipų filtrai: sužadinimo filtras ir absorbcinis filtras. Be bendrųjų šviesaus lauko kondensatorių, fluorescenciniuose mikroskopuose gali būti naudojami ir tamsaus lauko kondensatoriai, kuriuose naudojama mėlyna šviesa, siekiant padidinti fluorescencijos ir fono kontrastą. Šis metodas taikomas aptikti arba identifikuoti bakterijas, nudažytas fluorescenciniais pigmentais arba kartu su fluorescenciniais antikūnais.
5. Elektroniniai mikroskopai naudoja elektronų srautą kaip šviesos šaltinį. Palyginti su matoma šviesa, bangos ilgis skiriasi dešimtis tūkstančių kartų, o tai labai pagerina skiriamąją gebą. Magnetinė ritė naudojama kaip optinio stiprinimo sistema, o padidinimas gali siekti dešimtis tūkstančių ar šimtus tūkstančių kartų. Jis dažnai naudojamas virusų dalelėms. ir bakterijų ultrastruktūros stebėjimas.
Nedažytų mikrobų mėginių stebėjimas:
Nedažyti mėginiai paprastai gali būti naudojami bakterijų morfologijai, galiai ir judėjimui stebėti. Nedažytos bakterijos yra bespalvės ir skaidrios, o mikroskopu stebimos daugiausia dėl skirtumo tarp bakterijų ir supančios aplinkos lūžio rodiklio. Bakterijos su žvyneliais juda energingai, o bakterijos be žiuželių rodo netaisyklingą Browno judesį. Gyvybingos bakterijos, tokios kaip Treponema pallidum, Leptospira ir Campylobacter, turi išskirtines formas ir judėjimo modelius, kurie turi diagnostinę reikšmę. Dažniausiai naudojami metodai yra slėgio kritimo metodas, pakabos kritimo metodas ir kapiliarinis metodas.
1. Kabančio lašo metodas Užtepkite vazelinu aplink įgaubtą švaraus įgaubto stiklelio angą, paimkite bakterijų suspensijos žiedą su inokuliavimo kilpa ir įdėkite jį į dengiamojo stiklo centrą, tada sulygiuokite įgaubtą stiklelio angą su lašelį dengiančiojo stiklo centre ir uždėkite dangtelį, tada greitai jį apverskite, lengvai paspauskite dengiamąjį stiklelį, kad jis tvirtai priliptų prie vazelino įgaubtos angos krašte, tada stebėkite po didelės galios mikroskopas (arba tamsus laukas).
2. Paimkite bakterijų suspensijos žiedą su inokuliavimo kilpa ir padėkite jį į švaraus stiklelio centrą slėgio kritimo metodu ir švelniai uždenkite bakterijų suspensiją dengiamuoju stiklu, stengdamiesi, kad nesusidarytų oro burbuliukų ir bakterijų suspensija nuo perpildymo. Ryškaus lauko (arba tamsaus lauko) stebėjimas po didelės galios objektyvu.
3. Kapiliarinis metodas daugiausia naudojamas anaerobinių bakterijų kinetikai tirti. Paprastai rinkitės 60~70mm ilgio. Išsiurbę anaerobinių bakterijų suspensiją per kapiliarą, kurio anga yra 0.5-1,0 mm, abu kapiliaro galus užsandarinkite liepsna. Kapiliaras buvo pritvirtintas ant stiklelio plastikiniu popieriumi ir stebimas po didelės galios objektyvu tamsiame lauke.
Dažytų mikrobų mėginių stebėjimas mikroskopu:
Po to, kai bakterijų mėginys yra nudažytas, dėl ryškaus bakterijų ir supančios aplinkos spalvų kontrasto gali būti nustatytos bakterijų morfologinės savybės (tokios kaip dydis, forma, išsidėstymas ir kt.) ir kai kurios specialios struktūros. aiškiai stebimas įprastu optiniu mikroskopu (pvz., kapsulėmis, žvyneliais, sporomis ir kt.), o bakterijas galima klasifikuoti ir identifikuoti pagal dažymo reaktyvumą.
(1) Bendra dažymo bakterijomis procedūra Bendra dažymo bakterijomis procedūra yra: tepinėlis (džiovinimas) – fiksavimas – dažymas.
1. Tepinėlis Kraujo, sekretų, išskyrų, punkcijos skysčio ir skystos kultūros ruošimas bei tiesioginis plonasluoksnių tepinėlių ant stiklelių; skrodimas ar užkrėstų gyvūnų audiniai, medvilniniu tamponu ištepkite pažeidimą mėginiams paimti. Norėdami paruošti bakterijų kolonijas arba veją ant kietos terpės, pirmiausia naudokite inokuliavimo kilpą, paimkite įprasto fiziologinio tirpalo žiedą ir įdėkite jį į stiklelio centrą, tada naudokite sterilią inokuliavimo kilpą, kad paimtumėte nedidelį kiekį kultūros ir susmulkintumėte. tolygiai įprastu fiziologiniu tirpalu ir paskirstykite ant 1 cm2 Didelių ar mažų dažytų paviršių, leiskite natūraliai išdžiūti kambario temperatūroje arba lėtai išdžiūti per atstumą.
2. Fiksacijos tikslas – sunaikinti bakterijas, koaguliuoti bakterijų baltymus ir struktūrą bei palengvinti dažymą; skatinti bakterijų prilipimą prie stiklelio, kad skalbimo metu jų nenuplautų vanduo; pakeisti bakterijų pralaidumą dažams, o tai yra naudinga dažymo bakterijų ląstelių struktūrai. Dažniausiai fiksuojama kaitinant liepsna, o išdžiūvęs tepinėlis greitai perleidžiamas per liepsną 3 kartus. Geriau nenudeginti plaštakos nugarinės odos, kai ji liečiasi su stikleliu.
3. Dažymas Atsižvelgiant į skirtingus tikrinimo tikslus, pasirinkite skirtingus dažymo būdus dažymui. Dažydami dažų tirpalą įlašinkite lašais, kad padidėtų padengimas.
4. Mordantas Bet kuri medžiaga, galinti sustiprinti dažo ir dažyto objekto giminingumą, fiksuoti dažus ant dažyto objekto ir sukelti ląstelės membranos pralaidumo pokyčius, vadinama kostuku. Dažniausiai naudojamas alūnas, tanino rūgštis, metalų druskos ir jodas ir kt., o kaitinimas taip pat naudojamas dažymui skatinti. Mordantai gali būti naudojami tarp pirminio dažymo ir priešdažių, taip pat gali būti naudojami po fiksavimo arba fiksavimo ir dažymo sudėtyje.
5. Spalvos pašalinimas Bet koks cheminis veiksnys, galintis pašalinti dažyto objekto spalvą, vadinamas spalvinimo priemone. Etanolis, acetonas ir kt. dažniausiai naudojami kaip spalvinimo priemonės. Spalvinimo priemonė gali nustatyti bakterijų ir dažų derinio stabilumo laipsnį, kuris gali būti naudojamas diferenciniam dažymui.
6. Atspalvių pašalinimas Bakterijos arba jų struktūros, kurių spalva buvo pašalinta, dažnai yra priešdažomos priešdažo tirpalu, kad būtų lengviau stebėti. Prieš dažymo tirpalo spalva skiriasi nuo pirminio dažymo tirpalo spalvos, kad susidarytų ryškus kontrastas. Kontradažas neturi būti per stiprus, kad neuždengtų pradinio dažymo spalvos.
