Kokie yra mėginių reikalavimai šviesos mikroskopijai?
Optinio mikroskopo mėginio ruošimo procese mėginio pjūvio storis yra nuo 2 iki 25 um; elektroninio mikroskopo pjūvio storis yra 50-100nm (išskyrus aukštos įtampos elektroninį mikroskopą, mėginio storis gali siekti 1 um), todėl naudojamas pjaustymo metodas nėra vienodas.
Kalbant apie laikiklį, optinio mikroskopo sekcijos nešiklis yra stiklinis stiklelis, o elektroninio mikroskopo sekcijos nešiklis yra nešiklio tinklelis.
Kalbant apie fiksavimą, optinio mikroskopo pjūviai fiksuojami sudėtiniu fiksatoriumi, o elektroninio mikroskopo pjūviai pakartotinai fiksuojami vienu fiksatoriumi.
Kalbant apie dažymą, optinių mėginių dažymas yra gana paprastas. Atsižvelgiant į skirtingus stebėjimo pavyzdžius ir optinio mikroskopo tipą, dažniausiai pakanka naudoti keletą fiksuotų dėmių. Yra daug būdų pakartotinai dažyti elektroninio mikroskopo mėginius, be to, jie yra labai sudėtingi, pavyzdžiui, neigiamas dažymas, dažymas sidabru ir pan.
Kalbant apie įterpimą, parafinas, kolodijus, želatina ir kt. naudojami kaip optinių mikroskopo sekcijų įterpimo medžiagos; epoksidinė derva, polistireno derva, izobutileno derva ir vandenyje tirpi derva naudojamos kaip elektroninio mikroskopo sekcijų įterpimo priemonės.
Norint, kad mikroskopo matymo laukas gautų vienodą ir pakankamą apšvietimą, būtina sureguliuoti apšvietimo optinio kelio sistemą, kai mikroskopas pirmą kartą įrengiamas ir derinamas. reikalavimus. Be to, pakeitus lemputę naudojant mikroskopą, būtina teisingai suvokti apšvietimo optinio kelio sistemos reguliavimą, be to, tai būtina priemonė retkarčiais patikrinti mikroskopo veikimą. kasdienio naudojimo procesas. Mikroskopo apšvietimo optinio kelio sistemos reguliavimas daugiausia apima šiuos 4 elementus: 1. Preliminarus apšvietimo šaltinio lempos kameros reguliavimas už mikroskopo ribų ① Pirmiausia atidarykite lempos kameros gaubtą ir paspausdami įkiškite halogeninę lemputę į lizdą. spyruoklinis segtukas. Ant lemputės likę nešvarumai, pavyzdžiui, pirštų atspaudai, turės įtakos lemputės tarnavimo laikui. ②Padėkite lempos patalpą ant stalo, įjungę maitinimą specialiu atsuktuvu sureguliuokite lempos fokusavimo rankenėlės angą (pažymėtą "←→"), kad kaitinimo siūlelis būtų projektuojamas ant sienos 1-2 m atstumu, o kaitinimo siūlelio vaizdas pakoreguojamas. Tada sureguliuokite lempos aukštį, kad sureguliuotumėte kaitinamojo siūlo angą (pažymėtą "──"), kad kaitinamojo siūlelio padėtis būtų tinkama; tada sureguliuokite lempos kairiojo ir dešiniojo padėties reguliavimo varžtų skyles (pažymėtas "──"), kad kairė ir dešinė kaitinamojo siūlo padėtis būtų tinkama .
2. Šviesos šaltinio iliuminatoriaus (kaitinamojo siūlelio) padėties mikroskope apžiūros ir koregavimo tikslas – pritaikyti iliuminatoriaus vaizdo galą į objektyvo lęšio matymo lauką ir užtikrinti, kad regėjimo laukas mikroskopo vaizdas yra visiškai ir tolygiai gaunamas iš šviesos šaltinio perspektyvos. Apšvietimas, kuris yra būtina sąlyga norint sureguliuoti Kühler apšvietimo sistemą. Reikalingi pagrindiniai įrankiai: Centravimo teleskopuose yra mikroskopas. ① Atjunkite matinio stiklo movą lempos korpuse ir vėl uždėkite lempos korpusą ant mikroskopo ② Pasirinkite 10 × objektyvą, įjunkite šviesos šaltinio programą, kad rastumėte pavyzdį ir aiškiai sureguliuotumėte židinį, tada naudokite 40 × objektyvą. objektyvas, skirtas aiškiai sufokusuoti mėginį (40 × objektyvas Visą kaitinamojo siūlo vaizdą galima matyti aiškiai); ③ Maksimaliai atidarykite ir kondensatoriaus diafragmą, ir lauko diafragmą; ④ Atjunkite vieną iš okuliarų, pakeiskite jį centruojančiu teleskopu, suimkite baltą dalį, o kita ranka ištraukite juodą okuliarą. Kaitinamojo siūlelio vaizdas gali būti matomas regėjimo lauke; ⑤Jei kaitinimo siūlelio padėtis netinkama, sureguliuokite angą „──“, sureguliuokite siūlelio vaizdą horizontalia kryptimi, sureguliuokite „──“ angą ir reguliuokite kaitinamojo siūlo vaizdą vertikalia kryptimi, kol sureguliuokite kaitinamojo siūlo vaizdą į apskritą. vaizdas, kuris tiesiog užpildo objektyvo lęšio diafragmą; ⑥ Po reguliavimo įkiškite matinio stiklo įvorę atgal į pradinę padėtį, atjunkite centravimo teleskopą ir įdėkite okuliarą kitam reguliavimui. Aukščiau minėtą apšvietimo šviesos šaltinio lempos patalpos reguliavimą už mikroskopo ribų ir šviesos šaltinio iliuminatoriaus padėties mikroskopo viduje kalibravimą reikia atlikti tik tada, kai mikroskopas sumontuojamas ir pirmą kartą derinamas, o lemputė įjungta. pakeistas. Jei kyla painiavos, galite atkurti pradinę būseną, atlikdami aukščiau nurodytus veiksmus.
3. Teisingas Kohler apšvietimo (Kohler) sistemos sureguliavimas Teisingas mikroskopo sureguliavimas, viena iš pagrindinių užduočių yra apšvietimo šviesos kelio sistemos reguliavimas, o svarbiausia yra Kohler apšvietimo sistemos reguliavimas. Kiekvienas, kuris naudoja mikroskopus, ypač tiems, kurie daro mikrografijas, turėtų tam tikrą supratimą ir įvaldyti Kühler apšvietimo sistemos principus ir jos reguliavimo veiksmus, kad galėtų visiškai žaisti mikroskopo funkcijas. Gautos nuotraukos gali būti nuoseklesnės ir tobulesnės. Kühler apšvietimo sistemos principas yra paprastas: bet kurio šviesos šaltinio apšvietimo taško skleidžiama šviesa gali apšviesti mikroskopo matymo lauką, o kiekvieno šviesos šaltinio apšvietimo taško skleidžiama šviesa surenkama ir yra mikroskopo regėjimo laukas. Pasiekiamas labai pakankamas ir vienodas apšvietimas. Kuhlerio apšvietimo sistemos reguliavimo tikslas – pasiekti vienodą ir pakankamą apšvietimą stebimam regėjimo laukui ir neleisti, kad išsklaidyta šviesa paveiktų ar netrukdytų vaizdo sistemai, kad fotografuojant negatyvas nesusidarytų rūkas. Esminiai aukšto reguliavimo Kühler apšvietimo sistemos komponentai: lauko diafragma, kondensatoriaus sistema su reguliavimu ant ašies. ① Pasirinkite 10 × objektyvą ir 10 × okuliarą. ② Įdėkite priekinį kondensatoriaus objektyvą į optinį kelią, nustatykite diafragmos diafragmą į vidutinę padėtį (ne per didelę ar ne per mažą), tada pakelkite kondensatorių. į viršutinę padėtį ir nustatykite kondensatoriaus sukamąjį stalą į šviesaus lauko „J“ padėtį ③ Sureguliuokite lauko diafragmą iki minimumo (0,1)
④ Padėkite sandarų biologinį mėginį ant scenos, įjunkite šviesos šaltinį ir aiškiai sufokusuokite
⑤ Regėjimo lauke atsiras lokaliai apšviesta sritis arba ryški dėmė, kuri yra neryškus lauko diafragmos vaizdas, kuriame aiškiai matomos pavyzdžio detalės; Aiškiai žiūrėkite pavyzdžio detales
⑥ Šiek tiek nuleiskite kondensatorių, kad šviesi dėmė regėjimo lauke palaipsniui susiaurėtų ir palaipsniui taptų aiškus daugiakampis vaizdas, kuris yra aiškus lauko diafragmos vaizdas;
⑦ Įprastomis aplinkybėmis daugiakampis vaizdas nėra regėjimo lauko centre. Norint sureguliuoti daugiakampį regėjimo lauko vaizdą į centrinę padėtį, reikia sureguliuoti porą kondensatoriaus centravimo varžtų;
⑧ Palaipsniui atidarykite matymo lauko diafragmą, kad daugiakampis vaizdas taptų įrašytu matymo lauko daugiakampiu, ir toliau patikrinkite išlygiavimo sąlygas. Jei išlygiavimas nėra idealus, toliau šiek tiek reguliuokite išlygiavimo varžtą;
⑨ Šiek tiek atidarykite lauko diafragmą, kad daugiakampis vaizdas išnyktų regėjimo lauko krašte. Šiuo metu Kühler apšvietimo sistemos reguliavimas baigtas. Sureguliavus Kühler apšvietimo sistemą, visas matymo laukas buvo apšviestas tolygiai, o mikrografijos buvo ryškios ir aiškios su normaliu kontrastu.
