Kuo skiriasi fluorescencinė mikroskopija nuo apverstos mikroskopijos
Mikroskopas yra svarbus ląstelių kultūros ir susijusių darinių eksperimentų instrumentas. Šiuo metu rinkoje yra įvairių tipų mikroskopų, o išsirinkti poreikius atitinkantį ir tinkamą mikroskopą – iššūkis. Žemiau mes supažindinsime su apverstų mikroskopų ir fluorescencinių mikroskopų principais, kad kiekvienas galėtų pasirinkti.
Apverstasis mikroskopas, kaip ir įprastas mikroskopas, daugiausia susideda iš trijų dalių: mechaninės dalies, apšvietimo dalies ir optinės dalies.
Apverstojo mikroskopo sudėtis yra tokia pati kaip ir įprasto vertikaliojo mikroskopo, išskyrus tai, kad objektyvo lęšis ir apšvietimo sistema yra atvirkščiai – pirmasis yra po scena, o antrasis – virš scenos.
Ši konstrukcija žymiai padidina efektyvų atstumą tarp apšvietimo prožektorių sistemos ir scenos, todėl lengviau įdėti storesnius stebėjimo įrankius, tokius kaip kultivavimo indai ir ląstelių kultūros buteliai (žinoma, galima naudoti ir stiklines skaidres), o darbinis atstumas tarp objektyvas ir medžiaga neturi būti labai didelė.
Apverstasis mikroskopas naudojamas medicinos ir sveikatos įstaigose, universitetuose ir mokslinių tyrimų institutuose mikroorganizmams, ląstelėms, bakterijoms, audinių kultūroms, suspensijoms, nuosėdoms ir kt. stebėti. Jis gali nuolat stebėti ląstelių ir bakterijų dauginimosi bei dalijimosi procesą auginimo terpėje, gali užfiksuoti bet kokią šio proceso formą.
Plačiai naudojamas tokiose srityse kaip citologija, parazitologija, onkologija, imunologija, genų inžinerija, pramoninė mikrobiologija ir botanika.
Fluorescencinė mikroskopija naudojama tiriant medžiagų absorbciją, transportavimą, pasiskirstymą ir lokalizaciją ląstelėse.
Išbandytam objektui yra du fluorescencijos generavimo būdai: spontaninė fluorescencija, kurią tiesiogiai skleidžia ultravioletinė spinduliuotė; Antrinė fluorescencija atsiranda, kai stebimas objektas yra apdorojamas fluorescenciniais dažais ir prieš skleidžiant fluorescenciją veikiamas ultravioletinių spindulių.
Kai kurios ląstelėse esančios medžiagos, pavyzdžiui, chlorofilas, po ultravioletinių spindulių poveikio sukelia spontanišką fluorescenciją; Kai kurios medžiagos pačios gali nespinduliuoti fluorescencijos, tačiau nudažytos fluorescenciniais dažais arba fluorescuojančiais antikūnais, ultravioletiniais spinduliais jos taip pat gali skleisti antrinę fluorescenciją.
Fluorescencinis mikroskopas naudoja didelio šviesos efektyvumo taškinį šviesos šaltinį, kad išspinduliuotų tam tikro bangos ilgio šviesą (UV 365 nm arba UV mėlyna 420 nm) per spalvų filtravimo sistemą kaip sužadinimo šviesą, kuri sužadina pavyzdyje esančias fluorescencines medžiagas, kad išspindėtų įvairių spalvų fluorescencija. Po to jis stebimas padidinus objektyvo lęšį ir okuliarą.
Tokiu būdu, net esant silpnai fluorescencijai, jis yra lengvai atpažįstamas ir labai jautrus esant stipriam kontrastingam fonui. Jis daugiausia naudojamas tiriant ląstelių struktūrą, funkciją ir cheminę sudėtį.
