Kokie yra konfokalinės lazerinės mikroskopijos privalumai
Palyginti su tradiciniais plataus lauko mikroskopais, lazerinė skenuojanti konfokalinė mikroskopija pasižymi didelės raiškos, didelės skiriamosios gebos ir didelio jautrumo savybėmis. Jis plačiai naudojamas biomedicinos srityje ir tapo svarbia šios srities vaizdo gavimo priemone. Kodėl confocal gali sulaukti tiek daug meilės ir kokių privalumų ji turi? Šiame straipsnyje pateikiami trys aspektai, skirti aptarti konfokalinio privalumus.
Surinkite signalą tik židinio plokštumoje, kad vaizdas būtų aiškus ir neryškus
Taigi, kaip konfokalinė mikroskopija pasiekia šį pranašumą? Taip yra dėl pagrindinės konfokalinės aparatinės įrangos – skylutės, kaip parodyta 2 paveiksle. Tai maža skylutė prieš detektorių, esanti optinėje plokštumoje, sujungta su mėginio židinio plokštuma. Kai sužadinimo šviesa apšvitina mėginį, tiek židinio plokštuma, tiek ne židinio plokštuma mėginio srityje bus sužadinami, kad generuotų fluorescencinius signalus, sureguliuotų atitinkamą skylutės dydį (dažniausiai 1 Au), kad fluorescencijos signalas būtų židinio plokštumoje. (žalia punktyrinė linija) gali būti fluorescenciniai signalai (raudonos ir mėlynos brūkšninės linijos), kurie praeina pro skylutę, kad pasiektų detektorių iš židinio plokštumos, negali pasiekti detektoriaus per skylutę. Pridėjus aparatūros skylutes, konfokalis gali gauti aiškius ir aukštos kokybės vaizdus nekeičiant įprastų fluorescencinių mikroskopų gamybos metodo.
Dėl skylės egzistavimo signalą galime gauti tik židinio plokštumoje ir gauti didelės raiškos dvimatį vaizdą. Nuolat koreguojant Z ašies padėtį, galima gauti dvimačius vaizdus skirtingose Z ašies padėtyse ir ištisinių „optinių pjūvių“ vaizdų seriją. Gavus šiuos optinius pjūvius, 3D modulis su prietaiso programine įranga gali būti naudojamas atkurti 3D vaizdą, kad būtų sukurtas aiškus 3D vaizdas. Šis neardomasis, nenutrūkstamas optinių pjūvių vaizdų rinkinys realizuoja „ląstelių CT“ funkciją.
Kolokalizacijos rezultatų tikslumas glaudžiai susijęs su vaizdo raiška, todėl atliekant kolokalizacijos eksperimentus turime pasirinkti didesnės raiškos vaizdavimo metodą. Palyginti su tradiciniais mikroskopais, konfokalinė mikroskopija tapo galinga kolokalizacijos tyrimų priemone dėl savo didelės skiriamosios gebos pranašumų.
Dėl difrakcijos ribos įprastinė konfokalinė optinė skiriamoji geba yra apie 200 nm. Kai mums reikia stebėti didesnes nei 200 nm struktūras, konfokalinis gali tiksliai nustatyti kolokalizacijos laipsnį. Jei reikalinga kolokalizacijos analizė, galima pasirinkti konfokalinėje programinėje įrangoje įrengtą kolokalizacijos analizės modulį.
