Yra dviejų tipų fluorescenciniai mikroskopai, pagrįsti jų optiniu keliu:
1. Perdavimo fluorescencinis mikroskopas: sužadinimo šviesos šaltinis perduodamas per bandinio medžiagą per kondensatorių, kad sužadintų fluorescenciją. Paprastai naudojami tamsaus lauko šviesos kolektoriai arba įprasti šviesos kolektoriai gali būti naudojami reflektoriui reguliuoti, kad sužadinimo šviesa ir šoninė šviesa būtų paverčiama bandiniu. Tai gana senamadiškas fluorescencinis mikroskopas. Jo pranašumas yra tas, kad fluorescencija yra stipri esant mažam padidinimui, o trūkumas yra tas, kad fluorescencija susilpnėja, kai padidinimas didėja. Todėl geriau stebėti didesnes medžiagas.
2. Krintančio pluošto fluorescencinis mikroskopas Tai naujo tipo fluorescencinis mikroskopas, sukurtas šiais laikais. Skirtingai nuo ankstesnio, sužadinimo šviesa nukrenta nuo objektyvo į bandinio paviršių, naudojant tą patį objektyvo lęšį kaip apšvietimo kondensatorių ir objektyvo lęšį fluorescencijai surinkti. Į optinį kelią, kuris yra 45 laipsnių kampu šviesiojo urano atžvilgiu, reikia pridėti dviejų spalvų pluošto separatorių. Sužadinimo šviesa atsispindi objektyvo lęšyje ir sukoncentruojama į mėginį. Mėginio generuojama fluorescencija, taip pat sužadinimo šviesa, atsispindinti nuo objektyvo lęšio ir dengiamojo stiklo paviršiaus, vienu metu patenka į objektyvo lęšį ir grįžta į dichroinio pluošto separatorių, atskirdama sužadinimą ir fluorescenciją. Tada likusį sužadinimą sugeria blokuojantis filtras. Jei naudojami skirtingi sužadinimo filtrai / dviejų spalvų pluoštų separatoriai / blokuojančių filtrų deriniai, jie gali patenkinti skirtingų fluorescencinių reakcijų produktų poreikius. Šio fluorescencinio mikroskopo pranašumas yra tas, kad matymo lauko apšvietimas yra vienodas, vaizdas yra aiškus, o kuo didesnis padidinimas, tuo stipresnė fluorescencija.
(2) Fluorescencinio mikroskopo naudojimas
1. Įjunkite šviesos šaltinį ir itin aukšto slėgio gyvsidabrio lempą reikia keletą minučių pašildyti, kad ji pasiektų piką.
2. Transmisijos fluorescenciniam mikroskopui tarp lempos šaltinio ir kondensatoriaus reikia sumontuoti reikiamą sužadinimo filtrą, o už objektyvo lęšio turi būti sumontuotas atitinkamas blokuojantis filtras. Krintančio pluošto fluorescencinis mikroskopas turi įkišti reikiamą sužadinimo filtrą/dviejų spalvų pluošto separatorių/blokavimo filtro bloką į optinio kelio angą.
3. Stebėkite mažos galios mikroskopu ir pagal skirtingų modelių fluorescencinių mikroskopų reguliavimo įtaisus sureguliuokite šviesos šaltinio centrą taip, kad jis būtų visos apšvietimo taško centre.
4. Padėkite mėginio griežinėlius ir sufokusuokite juos, kad galėtumėte stebėti. Naudojant, reikia atkreipti dėmesį, kad galutinis filtras neturėtų būti tiesiogiai stebimas akimis, kad būtų išvengta akių pažeidimo; Stebint mėginius alyvos mikroskopu, reikia naudoti specialų nefluorescencinį alyvos mikroskopą; Išjungus aukšto slėgio gyvsidabrio lempą, jos negalima iš karto vėl įjungti. Reikia 5 minučių, kad vėl paleistumėte, kitaip jis bus nestabilus ir turės įtakos gyvsidabrio lempos eksploatavimo trukmei.
(3) Stebint fluorescenciniu mikroskopu mokymo platformoje naudojant mėlynos violetinės šviesos filtrą, galima pastebėti, kad ląstelės, nudažytos 0,01 procento akridino oranžinės spalvos fluorescenciniais dažais, branduolys ir citoplazma yra skatinami gaminti du skirtingus fluorescencinės spalvos (tamsiai žalia ir oranžinė raudona).
