Fluorescencinio mikroskopo pagrindai ir struktūriniai elementai
Fluorescencinė mikroskopija naudoja didelio šviesos efektyvumo tašką, kad išspinduliuotų tam tikro bangos ilgio šviesą (pvz., ultravioletinę šviesą 3650 colių arba purpurinę mėlyną šviesą 4200 colių) per filtrų sistemą kaip sužadinimo šviesą, kad sužadintų bandinio fluorescencines medžiagas, kad išspindėtų fluorescencija. įvairios spalvos Po to stebėkite per objektyvo lęšio ir okuliaro padidinimą. Tokiu būdu, esant stipriam kontrastiniam fonui, net jei fluorescencija yra labai silpna, ją lengva atpažinti ir jos jautrumas yra didelis. Jis daugiausia naudojamas ląstelių struktūros ir funkcijos bei cheminės sudėties tyrimams. Pagrindinę fluorescencinio mikroskopo struktūrą sudaro įprastas optinis mikroskopas ir kai kurie priedai (pvz., fluorescencinis šviesos šaltinis, sužadinimo filtras, dviejų spalvų pluošto skirstytuvas ir blokuojantis filtras ir kt.). Fluorescencinis šviesos šaltinis – paprastai naudojama itin aukšto slėgio gyvsidabrio lempa (50-200W), kuri gali skleisti įvairaus bangos ilgio šviesą, tačiau kiekviena fluorescencinė medžiaga turi sužadinimo bangos ilgį, kuris sukuria stipriausią fluorescenciją, taigi sužadinimo filtras ( Paprastai yra ultravioletinių, violetinių, mėlynų ir žalių sužadinimo filtrai), kurie leidžia tik tam tikro bangos ilgio sužadinimo šviesai praeiti ir apšvitinti bandinį, o sugerti kitą šviesą. Po to, kai kiekviena medžiaga yra apšvitinta sužadinimo šviesa, ji per labai trumpą laiką skleidžia matomą fluorescenciją, kurios bangos ilgis yra ilgesnis nei švitinimo bangos ilgis. Fluorescencija yra specifinė ir paprastai silpnesnė nei sužadinimo šviesa. Norint stebėti specifinę fluorescenciją, už objektyvo turi būti pridėtas blokavimas (arba slopinimas) ir naudojamas kartu su juo.
Skirtumas tarp fluorescencinio mikroskopo ir įprasto mikroskopo
1. Apšvietimo metodas dažniausiai yra episkopinis, tai yra, šviesos šaltinis projektuojamas ant mėginio per objektyvo lęšį;
2. Šviesos šaltinis yra ultravioletinė šviesa, bangos ilgis trumpesnis, o skiriamoji geba didesnė nei įprastų mikroskopų;
3. Yra du specialūs filtrai, priešais šviesos šaltinį esantis naudojamas matomai šviesai filtruoti, o esantis tarp okuliaro ir objektyvo – ultravioletiniams spinduliams, kad apsaugotų žmogaus akį.
Fluorescencinis mikroskopas taip pat yra savotiškas optinis mikroskopas, pagrindinis skirtumas yra tas, kad jų dviejų sužadinimo bangos ilgis skiriasi. Tai lemia skirtumą tarp fluorescencinio mikroskopo ir įprasto optinio mikroskopo struktūros ir naudojimo požiūriu.
Fluorescencinė mikroskopija yra esminė imunofluorescencinės citochemijos priemonė. Jį sudaro pagrindiniai komponentai, tokie kaip šviesos šaltinis, filtro plokštelių sistema ir optinė sistema. Tai yra naudoti tam tikrą šviesos bangos ilgį bandiniui sužadinti, kad jis skleistų fluorescenciją, ir stebėti bandinio fluorescencinį vaizdą stiprinant objektyvo lęšį ir okuliaro sistemą.
