Teisingas apverstos fluorescencinės mikroskopijos naudojimas
Apverstas fluorescencinis mikroskopas yra daugiafunkcis mikroskopas, naudojamas aukščiausios klasės biologijos mokslo tyrimų srityje. Jo struktūra yra sudėtinga ir brangi. Todėl, norėdami, kad medicinos absolventai tinkamai įsisavintų apverstojo fluorescencinio mikroskopo veikimo ir naudojimo standartus, mokytojai pirmiausia turi išmokyti pagrindinių žinių apie apverstą fluorescencinį mikroskopą, prieš parodydami tikrąjį apverstojo fluorescencinio mikroskopo veikimą. Jie turėtų supažindinti su invertuoto fluorescencinio mikroskopo sandara, principu, funkcija ir pagrindiniais naudojimo metodais, o tada parodyti skirtingas skirtingų mėginių funkcijas atliekant tam tikras naudojimo operacijas, palaipsniui standartizuojant apverstos fluorescencijos mikroskopo veikimą ir naudojimą medicinos magistrantams.
1. Teisingas vizualinio stebėjimo naudojimas. Viena iš apverstos fluorescencijos mikroskopo funkcijų yra stebėti ryškiame regėjimo lauke. Pagrindinis jo principas yra gauti vaizdą šviesiame fone, remiantis skirtinga kiekvienos bandinio dalies šviesos sugertimi po to, kai ji buvo apšviesta šviesa. Jis daugiausia tinka nudažytoms arba spalvotoms ląstelėms, audinių gabalėliams ir kitiems mėginiams stebėti.
2. Teisingas diferencinio stebėjimo naudojimas. Antroji apverstos fluorescencijos mikroskopo funkcija yra fazių skirtumo stebėjimas. Pagrindinis jo principas yra paversti skirtingų mėginio dalių optinio kelio skirtumą į amplitudės skirtumą ir stebėti per fazių skirtumo objektyvą su fazine plokšte ir prožektoriumi su apskrita apertūra. Jis daugiausia tinka gyvoms ląstelėms arba nedažytų audinių gabalams stebėti. Eksperimentinio mokymo procese, be teisingo vadovavimo medicinos magistrantams laikytis pagrindinių fazių skirtumo stebėjimo metodų, svarbiau yra padėti jiems suprasti ir įsisavinti pavyzdžius naudojant fazių skirtumo stebėjimą. Jiems būsimuose moksliniuose tyrimuose dažniausiai naudojamas metodas – mikroskopinis kultivuotų ląstelių stebėjimas. Pirma, renkantis ląstelių įrangą, paprastai rekomenduojama naudoti kultūros indus, lėkštes ir butelius iš stiklo ir plastiko. Jie dažniausiai yra bespalviai ir skaidrūs, juos galima tiesiogiai stebėti apverstu fluorescenciniu mikroskopu, nereikia išpilti ląstelių skysčio ar atlikti kitokį apdorojimą. Antra, mikroskopinio stebėjimo metu neatidarykite įrangos dangtelio, kad neužterštumėte ląstelių. Galiausiai, operatoriai turėtų dėvėti pirštines, kaukes ir baltus chalatus, kad ne tik apsaugotų savo sveikatą, bet ir išvengtumėte ląstelių užteršimo.
3. Teisingas fluorescencijos stebėjimo naudojimas. Trečioji apverstos fluorescencijos mikroskopo funkcija yra fluorescencijos stebėjimas. Pagrindinis jo principas yra naudoti sužadinimo šviesą, kad sužadintų mėginį, kad susidarytų fluorescencija ir taip būtų stebima mėginio forma ir padėtis. Jis daugiausia tinka fluorescencija pažymėtiems mėginiams stebėti. Fluorescencijos stebėjimas yra svarbi atvirkštinės fluorescencijos mikroskopijos funkcija, naudojant brangius priedus ir specialią paskirtį. Kad medicinos magistrantūros studentai teisingai įsisavintų fluorescencinio stebėjimo veiklos normas, dėstytojai juos ne tik moko pagrindinių veiklos metodų, bet dar svarbiau – išmoko jų išskirtinumo. Pirma, ruošiant mėginį, stiklelio ir dengiamojo stiklo paviršius turi būti lygus, o storis – tinkamas (sklidas turi būti nuo 0,8 mm iki 1,2 mm, o dengiantis stiklas – apie {{5). }}.17 mm); Mėginys turi būti tinkamo storio, vengiant ląstelių persidengimo arba priemaišų maskavimo; Sandarinimo priemonė turi naudoti vienodą glicerolio ir karbonato buferio mišinį (0,5 mol/L pH 9.{10}}.5). Antra, prieš stebint fluorescenciją, reikia išjungti kambario apšvietimą ir apversto fluorescencinio mikroskopo baltą šviesą, kad būtų užtikrinta, jog jie yra tamsioje patalpoje. Galiausiai, stebint fluorescenciją, stebėjimo laikas turėtų būti griežtai kontroliuojamas, paprastai 1-2 valandos per kartą, kitaip fluorescencija sumažės ir išnyks; Reguliuojant šviesos šaltinį, reikia nešioti apsauginius akinius, kad akiniai nepažeistų UV spindulių.
4. Teisingas vaizdo fiksavimo naudojimas. Atliekant mokslinius tyrimus, ne tik reikalaujama, kad naudojant apverstą fluorescencinę mikroskopiją būtų galima atlikti daugybę stebėjimų, bet ir kad apverstos fluorescencinės mikroskopijos pagalba būtų galima užfiksuoti vaizdą. Invertuoto fluorescencinio mikroskopo sistema sujungia optinį mikroskopą su kompiuteriu per fotoelektrinę konversiją, leidžiančią ne tik mikroskopiškai stebėti okuliare, bet ir realaus laiko dinaminį vaizdą stebėti, redaguoti ir saugoti kompiuteryje.
