Fluorescencinės mikroskopijos principai, charakteristikos ir naudojimas
Fluorescencinio mikroskopo principas ir struktūrinės charakteristikos: Fluorescencinis mikroskopas naudoja didelio šviesos efektyvumo taškinį šviesos šaltinį, kuris skleidžia tam tikro bangos ilgio šviesą (pvz., ultravioletinę šviesą 3650 colių arba ultravioletinę mėlyną šviesą 4200 colių) per spalvų filtravimo sistemą. sužadinimo šviesa. Fluorescencinė medžiaga mėginyje sužadinama, kad išspinduliuotų įvairių spalvų fluorescenciją, o tada stebima padidinant objektyvą ir okuliarą. Tokiu būdu, net esant silpnai fluorescencijai, jis yra lengvai atpažįstamas ir labai jautrus esant stipriam kontrastingam fonui, daugiausia naudojamas tiriant ląstelių struktūrą ir funkciją, taip pat cheminę sudėtį. Pagrindinę fluorescencinio mikroskopo struktūrą sudaro įprastas optinis mikroskopas ir kai kurie priedai (pvz., fluorescencinis šviesos šaltinis, sužadinimo filtras, bichromatinis pluošto separatorius ir blokuojantis filtras ir kt.). Liuminescenciniai šviesos šaltiniai – dažniausiai naudojamos itin aukšto slėgio gyvsidabrio lempos (50-200W), kurios gali skleisti įvairaus bangos ilgio šviesą. Tačiau kiekviena fluorescencinė medžiaga turi sužadinimo šviesos bangos ilgį, kuris sukuria stipriausią fluorescenciją, todėl reikia pridėti sužadinimo filtrus (dažniausiai ultravioletinius, violetinius, mėlynus ir žalius sužadinimo filtrus), kad tik tam tikro bangos ilgio sužadinimo šviesa galėtų praeiti ir apšviesti. mėginį, sugeriant visą kitą šviesą. Apšvitinta sužadinta šviesa, kiekviena medžiaga per labai trumpą laiką skleidžia matomą fluorescenciją, kurios bangos ilgis yra ilgesnis nei švitinimas. Fluorescencija turi specifiškumą ir paprastai yra silpnesnė nei sužadinimo šviesa. Norint stebėti specifinę fluorescenciją, už objektyvo lęšio reikia įdėti blokuojantį (arba slopinantį) filtrą.
Jis atlieka dvi funkcijas: pirma, jis sugeria ir blokuoja sužadinimo šviesos patekimą į okuliarą, kad nesutrikdytų fluorescencijos ir nepakenktų akims; antra, ji parenka ir leidžia praeiti specifinei fluorescencijai, parodydama specifinę fluorescencijos spalvą. Abu filtrų tipai turi būti parinkti naudoti kartu.
