Fluorescencinio mikroskopo veikimo principas ir struktūrinės charakteristikos
Fluorescencinis mikroskopas naudoja didelio šviesos efektyvumo tašką, kad išspinduliuotų tam tikro bangos ilgio šviesą (pvz., ultravioletinę šviesą 3650 arba violetinę-mėlyną šviesą 4200) per spalvų filtro sistemą kaip sužadinimo šviesą, o tada sužadina fluorescencines medžiagas mėginyje, kad išspindėtų. fluorescencija skirtingomis spalvomis, o tada stebi jas per objektyvo lęšio ir okuliaro stiprinimą. Tokiu būdu esant stipraus kontrasto fonui, net jei fluorescencija yra labai silpna, ją lengva atpažinti ir ji yra labai jautri. Jis daugiausia naudojamas tiriant ląstelių struktūrą ir funkciją bei cheminę sudėtį. Pagrindinę fluorescencinio mikroskopo struktūrą sudaro įprastas optinis mikroskopas ir kai kurie priedai (pvz., fluorescencinis šviesos šaltinis, sužadinimo filtras, dichroinio pluošto skirstytuvas ir blokuojantis filtras ir kt.). Liuminescencinės šviesos šaltinis —— Paprastai naudojama itin aukšto slėgio gyvsidabrio lempa (50-200W), kuri gali skleisti įvairaus bangos ilgio šviesą, tačiau kiekviena fluorescencinė medžiaga turi sužadinimo šviesos bangos ilgį, kuris sukuria stipriausią fluorescenciją, todėl būtina pridėti sužadinimo filtrus (dažniausiai ultravioletinius, violetinius, mėlynus ir žalius sužadinimo filtrus), kad į bandinį būtų perduodama tik tam tikro bangos ilgio sužadinimo šviesa, o visa kita šviesa būtų sugerta. Po to, kai kiekviena medžiaga yra apšvitinta sužadinimo šviesa, ji per labai trumpą laiką skleidžia matomą fluorescenciją, ilgesnę nei švitinimo bangos ilgis. Fluorescencija turi specifiškumą, kuris paprastai yra silpnesnis nei sužadinimo šviesa. Norint stebėti specifinę fluorescenciją, būtina užblokuoti (arba slopinti) už objektyvo ir turi būti naudojami kartu.
Skirtumas tarp fluorescencinio mikroskopo ir įprasto mikroskopo
1. Apšvietimo režimas dažniausiai yra epizodinis, tai yra, šviesos šaltinis projektuojamas ant mėginio per objektyvo lęšį;
2. Šviesos šaltinis yra ultravioletinė šviesa, kurios bangos ilgis trumpas ir didesnė nei įprastas mikroskopas;
3. Yra du specialūs filtrai, priešais šviesos šaltinį esantis naudojamas matomai šviesai filtruoti, o esantis tarp okuliaro ir objektyvo – ultravioletiniams spinduliams filtruoti, siekiant apsaugoti žmonių akis.
Fluorescencinis mikroskopas taip pat yra savotiškas optinis mikroskopas, pagrindinis skirtumas yra tas, kad skiriasi jų sužadinimo bangos ilgiai. Tai lemia skirtumą tarp fluorescencinio mikroskopo ir įprasto optinio mikroskopo sandara ir panaudojimu.
Fluorescencinis mikroskopas yra pagrindinis imunofluorescencinės citochemijos įrankis. Jį sudaro šviesos šaltinis, filtro plokštelių sistema ir optinė sistema. Jis naudoja tam tikro bangos ilgio šviesą, kad sužadintų bandinį, kad skleistų fluorescenciją, ir padidina ją per objektyvo lęšį ir okuliaro sistemą, kad galėtų stebėti bandinio fluorescencinį vaizdą.
