Biologinių mėginių elektroniniams mikroskopams ruošimas ir stebėjimas
Mikroskopo skiriamoji geba priklauso nuo naudojamos šviesos bangos ilgio. 1933 m. atsiradęs elektroninis mikroskopas pasiekė žymiai didesnę skiriamąją gebą nei optinis mikroskopas, nes kaip šviesos šaltiniai buvo naudojami elektronų pluoštai, kurių bangos ilgis yra daug trumpesnis nei matoma šviesa. Skirtingi šviesos šaltiniai taip pat lemia daugybę elektroninių mikroskopų ir optinių mikroskopų skirtumų.
Remiantis elektronų pluošto vaizdavimo principų skirtumais ir būdais, kuriais jie veikia mėginius, šiuolaikiniai elektroniniai mikroskopai išsivystė į daugybę tipų. Šiuo metu dažniausiai naudojami perdavimo elektroniniai mikroskopai ir skenuojantys elektroniniai mikroskopai. Pirmojo bendras padidinimas gali svyruoti nuo 1000 iki 10000000 kartų, o antrosios bendras padidinimas gali skirtis nuo 20 iki 300000 kartų. Šis eksperimentas daugiausia supažindina su dviejų tipų mikroskopo mėginių paruošimu, perdavimo elektronų mikroskopija ir skenuojančia elektronine mikroskopija.
2, Įranga
1. Escherichia coli štamas yra linkęs.
2. Tirpalas arba reagentas: pentilacetatas, koncentruota sieros rūgštis, bevandenis etanolis, sterilus vanduo, 2% natrio fosfotvolfratato (pH 6,5-8,0) vandeninis tirpalas, 0,3% polivinilformaldehidas (ištirpintas chloroforme) tirpalas, citochromo acetatas2, 3 amonio acetatas BR.
3. Prietaisai ar kiti įrankiai yra įprasti optiniai mikroskopai, variniai tinklai, porcelianiniai piltuvėliai, stiklinės, Petri lėkštelės, sterilūs lašintuvai, sterilūs pincetai, smeigtukai, stikleliai, skaičiavimo plokštės, vakuuminio dengimo mašinos, kritinių taškų džiovintuvai ir kt.
3, operacijos žingsniai
(1) Mėginių paruošimas ir stebėjimas perdavimo elektronų mikroskopijai
1. Metalinio tinklelio apdorojimas
Optinio mikroskopo mėginys dedamas ant stiklelio stebėjimui. Tačiau perdavimo veidrodyje, kadangi elektronai negali prasiskverbti pro stiklo lakštą, tinklinė medžiaga gali būti naudojama tik kaip laikiklis, paprastai vadinamas nešiklio tinkleliu. Laikiklio tinklelis gali būti suskirstytas į įvairias specifikacijas dėl skirtingų medžiagų ir formų, tarp kurių dažniausiai naudojamas varinis tinklelis su 200-400 akių (skylių skaičius). Vario tinklelis prieš naudojimą turi būti apdorotas, kad pašalintumėte nešvarumus ir išliktų švarūs, kitaip tai turės įtakos atraminės plėvelės kokybei ir pavyzdinių nuotraukų skaidrumui. Šiame eksperimente naudotą 400 akių vario tinklelį galima apdoroti tokiu būdu: iš pradžių keletą valandų pamirkykite ir plaukite pentilacetatu, po to keletą kartų nuplaukite distiliuotu vandeniu, o galiausiai panardinkite ir plūduriuokite vario tinklelį bevandeniame etanolyje, kad jis būtų dehidratuotas. Jei vario tinklelis po aukščiau nurodytų metodų vis dar nėra švarus, jį galima 1-2 minutes pamirkyti praskiestoje koncentruotoje sieros rūgštyje (1:1) arba keletą minučių pavirti 1% NaOH tirpale, kelis kartus perplauti distiliuotu vandeniu, o vėliau dehidratuoti bevandeniame etanolyje.
