Stiklinių stiklelių optinio mikroskopo storio reikalavimai
Mikroskopinis dehidratavimas ir mėginio tvirtinimas: dėl pakartotinio centrifugavimo ląstelės prarandamos, todėl optinei mikroskopijai geriausia ląsteles pritvirtinti prie stiklelio arba plastikinio lakšto paviršiaus, kad ląstelės būtų dehidratuotos ir išdžiovintos kartu su stiklu. skaidrė arba plastikinis lakštas. Reikalavimai stiklelių storiui atliekant optinę mikroskopiją Kad ląstelės galėtų prisitvirtinti prie stiklelių ar plastiko lakštų, ant stiklelių ar plastiko lakštų pirmiausia reikia pakloti plėvelės sluoksnį. Plėvelės klojimo būdas yra toks:
(1) Paprasčiausias optinės mikroskopijos metodas yra plono polivinilo formalios (formvaro) plėvelės sluoksnio klojimas. Išvalytas stikleles pamirkykite (0.5-1) procentų polivinilo formalaus chloroformo tirpale. Po to, kai atmosfera išgaruoja, ant stiklelių atsiranda balta plėvelė. Kad plėvelė pasikeistų, stiklelius keletą kartų pakratykite chloroforme. Plonas ir paruoštas naudojimui.
(2) Ant nuvalyto stiklelio užlašinkite 0.1 platumos poli-L-lizino (1 mg polilizino ištirpinkite 1 ml filtruoto vandens ruošimo metu) ir įdėkite į 450C temperatūros tiekimo dėžutę, kai lašelis išsiskleis. . sausas. Šis metodas yra geriausias, nes poli-L-lizinas yra teigiamai įkrautas, todėl gali prisijungti daugiau paviršiaus neigiamai įkrautų ląstelių.
(3) Į distiliuotą vandenį įpilkite plazmos ir glicerolio santykiu (30--40) ir ({2}}) procentais, atsižvelgiant į optinio mikroskopo reikalavimus stiklelio storiui, kad susidarytų glicerolio baltymas. sprendimas. Skystis lašinamas ant nuvalyto stiklelio, išskleidžiamas ir džiovinamas optiniu mikroskopu. Paklota baltyminė plėvelė panardinama į 2 procentų glutaraldehidą, kad baltymas fiksuotų, nuplaunamas ir išdžiovinamas vėlesniam naudojimui. Prieš naudojimą plazma užlašinama ant baltyminės plėvelės „Suaktyvinkite“, po 30 minučių nuplaukite buferiu ir galėsite tepti tiesiai.
Fiksuotos ir išvalytos ląstelės skaitmeniniu mikroskopu paverčiamos tinkamos koncentracijos ląstelių suspensijos su filtruotu vandeniu, o optinis mikroskopas dedamas ant stiklelio arba plastiko lakšto, padengto membrana, ir dedamas į drėgną, žemą patalpą. temperatūros (40C) aplinkos (30-120) minučių, kad ląstelės galėtų prisitvirtinti prie membranos. Smulkiu pincetu paimkite stiklelį ir pakratykite jį švariame dvigubai distiliuotame vandenyje, o neprisijungusias ląsteles nuplaukite optiniu mikroskopu. Reikalavimai stiklelių storiui optiniuose mikroskopuose Poliarizuojantys mikroskopai greitai dedami į indą, užpildytą 50 procentų acetono (arba etanolio). Dehidratacijos procesas – stikleliai įdedami į acetoną arba etanolį, didinant koncentraciją kas 3 minutes, o optiniu mikroskopu arba nuolat didinant dehidratuojančios medžiagos koncentraciją stikliniame stiklelyje. Remiantis autoriaus laboratorine patirtimi, pastaroji operacija yra patogesnė. Taikant specifinį optinės mikroskopijos metodą, kas 3 minutes galima išsiurbti pusę dehidratuojančios medžiagos, esančios talpykloje, o tada įpilti vienodą kiekį 100 procentų koncentracijos dehidratuojančios medžiagos. Po 5-6 operacijų dehidratuojančios medžiagos koncentracija mikroskopo kainos indelyje pasiekia virš 0,5 proc. ir ląstelės sėkmingai dehidratuojamos. Išdžiūvus kritiniame taške, stiklinė stiklelis arba plastikinis lakštas priklijuojamas prie mėginio atramos laidžiais klijais metalo dengimui. Taip pat yra patogumų pritvirtinti ląsteles prie membranų, nustatytų trečiuoju metodu. Optinis mikroskopas gali pakabinti ląsteles, pritvirtintas maža glutaraldehido koncentracija ant „aktyvintos“ baltyminės plėvelės. Optiniam mikroskopui reikia, kad stiklelio storis būtų dedamas 10 minučių, o stiklelis arba plastikinis lakštas mirkomas 2 procentų glutaraldehidu. Po 30 minučių nuplaukite filtruotu dvigubai distiliuotu vandeniu, tada nusausinkite, išdžiovinkite ir padenkite metalu pagal aukščiau pateiktą metodą.
