Pastabos ir patarimai, kaip naudoti kelių fazių kontrasto mikroskopus
1) Sumontuokite fazinio kontrasto įrenginį: nuimkite įprasto mikroskopo kondensatoriaus lęšį ir ant atitinkamo mikroskopo sumontuokite kondensatoriaus lęšį su žiedine diafragma; išimkite įprastą mikroskopo objektyvo lęšį ir pakeiskite jį objektyvu su fazine plokštele; okuliarą pakeiskite Focusing okuliarais fazinio kontrasto mikroskopams; prie šviesos šaltinio šviesos įėjimo įdedami specialūs žali filtrai (kartais nebūtini).
2) Šviesos išlygiavimas ir fokusavimas: reguliuokite fokusavimo okuliarą ir storio reguliavimo varžtą, kol matymo lauke bus aiškiai matyti baltas apskritimas ir juodas apskritimas. Juodas apskritimas yra fiksuotas, o baltą apskritimą galima perkelti sureguliuojant kondensatoriaus įtaiso varžtą, kad juodas ir baltas apskritimas visiškai sutaptų. Nuimkite fokusavimo okuliarą ir pakeiskite jį originaliu mikroskopo okuliaru, kad patikrintumėte.
Fazinio kontrastinio mikroskopo naudojimo problemų analizė
1. Mėginio storio įtaka Atliekant fazinio kontrasto stebėjimą, mėginio storis turi būti 5 μm arba plonesnis. Naudojant storesnį mėginį, viršutinis mėginio sluoksnis yra labai skaidrus, tačiau gilusis sluoksnis bus neryškus ir sukels fazės poslinkio trikdžius. ir šviesos sklaida.
2. Dengiamojo stiklo ir slankiojančio stiklo įtaka Mėginys turi būti uždengtas dengiamuoju stiklu, priešingu atveju šviesus žiedinės diafragmos žiedas ir tamsus fazinės plokštės žiedas sunkiai persidengia. Fazinio kontrasto stebėjimas taip pat kelia aukštus reikalavimus slankiojančio stiklo ir dengiamojo stiklo kokybei. Esant įbrėžimams, netolygiam storiui ar nelygumams, atsiranda ryškus žiedo iškraipymas ir faziniai trukdžiai. Be to, kai slankiklis yra per storas arba per plonas, ryškus žiedinės diafragmos žiedas taps didesnis arba mažesnis.
3. Halo ir blukimo efektas Fazinio kontrasto mikroskopo vaizdavimo procese, kai struktūra tamsėja dėl fazės vėlavimo, tai yra ne šviesos praradimas, o šviesos persiskirstymo vaizdo plokštumoje rezultatas. Taigi šviesa, kuri, matyt, prarandama tamsiose vietose, aplink tamsesnius objektus atrodys kaip šviesi aureolė. Tai fazinio kontrasto mikroskopijos trūkumas, trukdantis stebėti smulkias struktūras, o halo reiškinys yra rimtesnis, kai žiedinė diafragma yra labai siaura. Kitas fazinio kontrasto mikroskopijos reiškinys yra šešėlio efektas, kuris reiškia kontrasto praradimą didesnio ploto kraštuose su tuo pačiu fazės vėlavimu, kai stebimas fazės kontrastas.
4. Fazių inversija Kai n'n, šviesus ir tamsus vaizdo kontrastas yra priešingas, o tai vadinama fazės inversija. Neatpažįstama, kai fazių skirtumas δ=0, o kontrastas didėja didėjant δ, o fazės inversija atsiras, kai δ toliau didės iki tam tikros vertės. Naudojant 90 procentų didelės absorbcijos vertės (didelio kontrasto) objektyvą, ši transformacijos vertė yra apie 0,55 λ, o naudojant 70 procentų standartinės absorbcijos vertės objektyvą, ji yra apie 0,33 λ . Siekiant išspręsti mažesnius optinio kelio skirtumus, turėtų būti naudojami tikslai su didesnėmis absorbcijos vertėmis.
