Žinios apie konfokalinę fluorescencinę mikroskopiją
Pagrindinis konfokalinės fluorescencinės mikroskopijos principas: bandiniui apšvitinti naudojamas taškinis šviesos šaltinis, o židinio plokštumoje susidaro aiškiai apibrėžta nedidelė šviesos dėmė. sudarytas iš skirstytuvų. Spindulio skirstytuvas siunčia fluorescenciją tiesiai į detektorių. Priešais šviesos šaltinį ir detektorių yra skylutė, atitinkamai vadinama apšvietimo smeigtuku ir aptikimo skylute. Jų geometrinis dydis yra toks pat, apie 100-200nm; Palyginti su šviesos tašku židinio plokštumoje, jie abu yra sujungti, tai yra, šviesos taškas praeina per lęšių seriją ir galiausiai gali būti sufokusuotas į apšvietimo skylutę ir aptikimo skylutę tuo pačiu metu. Tokiu būdu šviesa iš židinio plokštumos gali būti suartinta aptikimo angos srityje, o išsklaidyta šviesa iš viršaus arba žemiau židinio plokštumos yra užblokuota už aptikimo angos ir negali būti vaizduojama. Lazeris nuskaito mėginį taškas po taško, o fotodaugiklio vamzdelis, aptikęs skylutę, taip pat taškas po taško gauna atitinkamo šviesos taško konfokalinį vaizdą, kuris paverčiamas skaitmeniniu signalu ir perduodamas į kompiuterį, o galiausiai sujungiamas į aiškų vaizdą. konfokalinis visos židinio plokštumos vaizdas ekrane .
Kiekvienas židinio plokštumos vaizdas iš tikrųjų yra optinis bandinio skerspjūvis, o šis optinis skerspjūvis visada turi tam tikrą storį, dar vadinamą optiniu plonu pjūviu. Kadangi šviesos intensyvumas židinio taške yra daug didesnis nei ne židinio taške, o ne židinio plokštumos šviesa filtruojama skylute, konfokalinės sistemos lauko gylis yra maždaug lygus nuliui, o skenavimas palei Z -ašyje galima realizuoti optinę tomografiją, formuojant Stebėkite dvimatę optinę pjūvį sufokusuotoje mėginio vietoje. Sujungus XY plokštumos (židinio plokštumos) skenavimą su Z ašies (optinės ašies) skenavimu, trimatį mėginio vaizdą galima gauti kaupiant dvimačius ištisinių sluoksnių vaizdus ir apdorojus specialia kompiuterine programine įranga.
