Kaip išsirinkti tinkamą fluorescencinį mikroskopą
Fluorescencinis mikroskopas yra standartinė mikroskopinio vaizdo gavimo įranga, skirta laboratorijoms ir patologijos skyriams. Jis naudoja fluorescencines charakteristikas stebėjimui ir vaizdavimui. Jis plačiai naudojamas ląstelių biologijoje, neurobiologijoje, botanikoje, mikrobiologijoje, patologijoje, genetikoje ir kitose srityse. Fluorescencinis vaizdavimas turi didelio jautrumo ir didelio specifiškumo privalumus ir yra labai tinkamas stebėti specifinių baltymų ir organelių pasiskirstymą audiniuose ir ląstelėse, tirti kolokalizaciją ir sąveiką, sekti gyvybės dinaminius procesus, tokius kaip jonų koncentracijos pokyčiai. ir kt.
Mikroskopo pasirinkimas
Fluorescenciniai mikroskopai daugiausia skirstomi į tris kategorijas: vertikalieji fluorescenciniai mikroskopai (tinkami pjūviams), atvirkštiniai fluorescenciniai mikroskopai (tinka gyvoms ląstelėms, atsižvelgiant į pjūvius), stereoskopiniai fluorescenciniai mikroskopai (tinkami didesniems egzemplioriams, pvz., augalams, zebražuvėms (suaugusiems/suaugusiems). embrionas), medaka, pelės / žiurkės organai ir kt.).
Fluorescencinio filtro kubelių pasirinkimas
Be fluorescencinių zondų sužadinimo ir emisijos bangos ilgių, renkantis filtrų blokus taip pat reikia atsižvelgti į tai, ar yra nespecifinio sužadinimo ir kryžminės spalvos įvairiomis spalvomis pažymėtuose mėginiuose. Eksperimente bandysime sužadinimui parinkti artimiausią sužadinimo smailei bangos ilgį, o priėmimo diapazone turi būti ir emisijos smailė. Pavyzdžiui, Alexa Fluor 488 sužadinimo smailė yra 500 nm, o fluorescenciniame mikroskope galima pasirinkti 480/40 sužadinimo filtrą. Fluorescenciniuose mikroskopuose dažniausiai naudojamus fluorescencinių filtrų kubus galima suskirstyti į du tipus: ilgąjį pralaidumą (trumpai – LP) ir juostinį (trumpai – BP), kuriuos taip pat reikia parinkti pagal poreikius.
Liuminescencinio šviesos šaltinio pasirinkimas
Šiuo metu dažniausiai naudojami fluorescenciniai šviesos šaltiniai yra gyvsidabrio lempos, metalų halogenų lempos ir LED šviesos šaltiniai, kurie pastaraisiais metais sparčiai vystėsi. Liuminescencinio šviesos šaltinio spektras yra nenutrūkstamas ir nenutrūkstamas, o energija skirtingose juostose skirsis. Dėl santykinai siauros spektrinės juostos, stabilesnės energijos išvesties, ilgo tarnavimo laiko, saugumo ir aplinkos apsaugos bei daugelio kitų privalumų LED šviesos šaltinis pamažu tampa pagrindiniu fluorescencinio mikroskopo šviesos šaltiniu.
konfokalinis mikroskopas
Tradicinio fluorescencinio mikroskopo stebėjimo metu dėl fluorescencinių žymenų medžiagų ir autofluorescencinių struktūrų sutapimo jie yra glaudžiai sujungti, o tradicinis epifluorescencinio mikroskopo objektyvas ne tik renka šviesą iš židinio plokštumos, bet ir renka išsklaidytą šviesą virš ir žemiau židinio plokštuma, todėl labai sumažėja vaizdo skiriamoji geba ir kontrastas.
Konfokalinis vaizdas išsprendžia šią problemą, aptikdamas tik dalį šviesos, atsispindėjusios nuo židinio plokštumos. Šviesos šaltinis praeina pro skylutę, kad židinio plokštumoje susidarytų mažas ir smulkus šviesos taškas. Iš židinio plokštumos skleidžiama šviesa surenkama objektyvo lęšiu. Didžioji dalis fluorescencijos, skleidžiamos iš taško, esančio virš arba žemiau objektyvo lęšio židinio plokštumos, negali susilieti su maža skylute. Tik židinio plokštumoje esanti fluorescencija ir nedidelė dalis nefokusuotos fluorescencijos gali prasiskverbti pro skylutę, o už židinio plokštumos esantys šviesos pluoštai susilieja skylutės plokštės priekyje arba gale ir neleidžia patekti į detektorių. skylutė. Aptiktas vaizdas yra vaizdas iš židinio plokštumos, todėl galutinė vaizdo kokybė labai pagerėja.
Dėl lazerinio skenuojančio konfokalinio mikroskopo privalumų ir funkcijų praktiškumo konfokalinis mikroskopas yra nepakeičiamas eksperimentinis asistentas didelio tikslumo ląstelių biologijos, botanikos ir ląstelių tyrimų srityse. Tuo pačiu metu būsimame mokslinių tyrimų centre tai bus pati pagrindinė ir pagrindinė mokslinių tyrimų priemonė.
