Kuo fluorescencinė mikroskopija skiriasi nuo konfokalinės lazerinės mikroskopijos
Fluorescencinis mikroskopas
1. Fluorescencinis mikroskopas naudoja ultravioletinę šviesą kaip šviesos šaltinį, kad apšviestų tiriamą objektą, kad jis skleistų fluorescenciją, o tada po mikroskopu stebi objekto formą ir vietą. Fluorescencinė mikroskopija naudojama medžiagų absorbcijai ir transportavimui ląstelėse, taip pat cheminių medžiagų pasiskirstymui ir padėties nustatymui tirti. Kai kurios ląstelėse esančios medžiagos, pavyzdžiui, chlorofilas, gali fluorescuoti po ultravioletinių spindulių apšvitinimo; kai kurios medžiagos pačios negali fluorescuoti, tačiau nudažytos fluorescenciniais dažais ar fluorescuojančiais antikūnais, apšvitinus ultravioletiniais spinduliais jos gali fluorescuoti. Fluorescencinė mikroskopija yra viena iš kokybinių ir kiekybinių tokių medžiagų tyrimų priemonių.
2. Fluorescencinio mikroskopo principas:
(A) Šviesos šaltinis: šviesos šaltinis spinduliuoja įvairaus bangos ilgio šviesą (nuo ultravioletinių iki infraraudonųjų).
(B) Sužadinimo filtro šviesos šaltinis: perduoda tam tikro bangos ilgio šviesą, dėl kurios mėginys gali fluorescuoti, tuo pačiu blokuodamas šviesą, kuri yra nenaudinga fluorescencijai skatinti.
(C) Fluorescenciniai mėginiai: dažniausiai nudažyti fluorescenciniais pigmentais.
(D) Blokuojantis filtras: blokuoja sužadinimo šviesą, kurios nesugeria mėginys, ir selektyviai perduoda fluorescenciją. Kai kurie fluorescencijos bangos ilgiai taip pat yra selektyviai perduodami. Mikroskopas, kuris kaip šviesos šaltinį naudoja ultravioletinę šviesą, kad apšviestas objektas fluorescuotų. Pirmą kartą elektroninis mikroskopas buvo surinktas 1931 m. Berlyne, Vokietijoje, Knorr ir Hallowska. Šis mikroskopas vietoj šviesos pluošto naudoja greitaeigį elektronų pluoštą. Kadangi elektronų srauto bangos ilgis yra daug trumpesnis nei šviesos, elektroninio mikroskopo padidinimas gali siekti 800,000 kartų, o minimali skiriamosios gebos riba yra 0,2 nanometro. Skenuojantis elektroninis mikroskopas, pradėtas naudoti 1963 m., leidžia žmonėms pamatyti mažas struktūras objektų paviršiuje.
3. Taikymo sritis: naudojama mažų objektų vaizdams padidinti. Paprastai naudojamas stebėti biologiją, mediciną, mikroskopines daleles ir kt.
konfokalinis mikroskopas
1. Konfokalinis mikroskopas prie atspindėtos šviesos optinio kelio prideda pusiau atspindintį pusiau lęšį, kuris per lęšį perėjusią atspindėtą šviesą laužia kitomis kryptimis. Yra pertvara, kurios židinyje yra skylutė, o skylutė yra Židinio taške, už pertvaros, yra fotodaugiklio vamzdis. Galima įsivaizduoti, kad atspindėta šviesa prieš ir po aptikimo šviesos židinio praeina per šią konfokalinę sistemą ir negali būti sufokusuota į mažą skylę, o bus užblokuota pertvaros. Taigi fotometras matuoja atspindėtos šviesos intensyvumą židinyje.
2. Principas: tradiciniuose optiniuose mikroskopuose naudojami lauko šviesos šaltiniai, o kiekvieno bandinio taško vaizdą trikdys difrakcija arba išsklaidyta šviesa iš gretimų taškų; Lazerinio skenavimo konfokaliniai mikroskopai naudoja lazerio spindulius, kad suformuotų taškinius šviesos šaltinius per apšviečiančias skylutes, kad apšviestų bandinio vidų. Kiekvienas židinio plokštumos taškas nuskaitomas, o apšviestas bandinio taškas atvaizduojamas aptikimo skylutėje, kurią taškas po taško arba eilutė po eilutės priima fotodaugintuvo vamzdelis (PMT) arba šaltojo sujungimo įtaisas (cCCD), esantis už aptikimo. smeigtukas, ir greitai Kompiuterio monitoriaus ekrane susidaro fluorescencinis vaizdas. Apšvietimo skylutė ir aptikimo skylutė yra susietos su objektyvo lęšio židinio plokštuma. Židinio plokštumos taškai tuo pačiu metu sufokusuojami į apšvietimo skylutę ir emisijos skylutę. Taškai, esantys už židinio plokštumos, aptikimo skylutėje nebus vaizduojami. Tai gaunama Konfokaliniai vaizdai yra optiniai bandinių skerspjūviai, pašalinantys neryškių vaizdų paprastus mikroskopus trūkumus.
3. Taikymo sritys: medicina, gyvūnų ir augalų moksliniai tyrimai, biochemija, bakteriologija, ląstelių biologija, audinių embriologija, maisto mokslas, genetika, farmakologija, fiziologija, optika, patologija, botanika, neuromokslai, jūrų biologija ir medžiagų mokslas, elektronika , mechanika, naftos geologija, mineralogija.
