Su fluorescenciniu mikroskopu susijusios žinios
Pagrindinis konfokalinės fluorescencinės mikroskopijos principas: bandiniui apšvitinti naudojamas taškinis šviesos šaltinis, o židinio plokštumoje susidaro aiškiai apibrėžta nedidelė šviesos dėmė. sudarytas iš skirstytuvų. Spindulio skirstytuvas siunčia fluorescenciją tiesiai į detektorių. Priešais šviesos šaltinį ir detektorių yra skylutė, atitinkamai vadinama apšvietimo smeigtuku ir aptikimo skylute. Jų geometrinis dydis yra toks pat, apie 100-200nm; Palyginti su šviesos tašku židinio plokštumoje, jie abu yra sujungti, tai yra, šviesos taškas praeina per lęšių seriją ir galiausiai gali būti sufokusuotas į apšvietimo skylutę ir aptikimo skylutę tuo pačiu metu. Tokiu būdu šviesa iš židinio plokštumos gali būti suartinta aptikimo angos srityje, o išsklaidyta šviesa iš viršaus arba žemiau židinio plokštumos yra užblokuota už aptikimo angos ir negali būti vaizduojama. Lazeris nuskaito mėginį taškas po taško, o fotodaugiklio vamzdelis, aptikęs skylutę, taip pat taškas po taško gauna atitinkamo šviesos taško konfokalinį vaizdą, kuris paverčiamas skaitmeniniu signalu ir perduodamas į kompiuterį, o galiausiai sujungiamas į aiškų vaizdą. konfokalinis visos židinio plokštumos vaizdas ekrane .
Kiekvienas židinio plokštumos vaizdas iš tikrųjų yra optinis bandinio skerspjūvis, o šis optinis skerspjūvis visada turi tam tikrą storį, dar vadinamą optiniu plonu pjūviu. Kadangi šviesos intensyvumas židinio taške yra daug didesnis nei ne židinio taške, o ne židinio plokštumos šviesa filtruojama skylute, konfokalinės sistemos lauko gylis yra maždaug lygus nuliui, o skenavimas palei Z -ašyje galima realizuoti optinę tomografiją, formuojant Stebėkite dvimatę optinę pjūvį sufokusuotoje mėginio vietoje. Sujungus XY plokštumos (židinio plokštumos) skenavimą su Z ašies (optinės ašies) skenavimu, trimatį mėginio vaizdą galima gauti kaupiant dvimačius ištisinių sluoksnių vaizdus ir apdorojus specialia kompiuterine programine įranga.
Tai reiškia, kad aptikimo skylutė ir šviesos šaltinio skylutė visada sufokusuotos į tą patį tašką, kad fluorescencija, sužadinta už židinio plokštumos, negalėtų patekti į aptikimo angą.
Paprasta lazerio konfokalinio veikimo principo išraiška yra ta, kad jis naudoja lazerio šviesą kaip šviesos šaltinį. Remiantis tradiciniu fluorescenciniu mikroskopu, jis prideda lazerinį nuskaitymo įrenginį ir konjuguoto fokusavimo įrenginį ir yra skaitmeninių vaizdų gavimo ir apdorojimo sistema, valdoma kompiuteriu.
