Fluorescencinio mikroskopo pagrindinė veikla
a. Išjunkite šviesą kambaryje ir įjunkite mikroskopo gyvsidabrio lempą;
b. Pasirinkite atitinkamą filtrą pagal mėginyje pažymėtą fluoresceiną;
c. Padėkite pavyzdį ir suraskite tinkamą matymo lauką;
d. Jei reikia fotografuoti, patvirtinkite, kad spalvota juosta įdėta į fotoaparatą;
e. Įjunkite asmenukės įrenginį, pasirinkite rankinę pavarą, paprastai fotografavimo greitis yra 0.5-10 sekundės;
f. Po naudojimo išjunkite visą maitinimą ir užregistruokite naudojimą. į
į
3. Fluorescencinio vaizdo įrašymo būdas
Fluorescenciniu mikroskopu matomas fluorescencinis vaizdas turi ir morfologines charakteristikas, ir fluorescencinę spalvą bei ryškumą. Vertinant rezultatus, jie turi būti derinami, kad būtų galima visapusiškai įvertinti. Rezultatai registruojami remiantis subjektyviais rodikliais, tai yra darbuotojų vizualiniu stebėjimu. Kaip bendras kokybinis stebėjimas, iš esmės patikimas. Tobulėjant technologijoms ir mokslui, objektyvūs rodikliai, pavyzdžiui, ląstelių spektrofotometrai, vaizdo analizatoriai ir kiti instrumentai, naudojami įvairiems vertinimo rezultatams įrašyti. Tačiau šiais instrumentais užfiksuoti rezultatai taip pat turi būti derinami su subjektyviais sprendimais. į
Fluorescencinio mikroskopo fotografavimas yra labai reikalingas fluorescenciniams vaizdams įrašyti. Kadangi fluorescencija lengvai išnyksta ir susilpnėja, rezultatus būtina registruoti realiu laiku. Metodas iš esmės yra toks pat kaip ir įprastos mikrofotografijos. Tiesiog reikia naudoti didelės spartos šviesai jautrią plėvelę. Kadangi ultravioletinė šviesa stipriai veikia fluorescencijos gesinimą, pvz., FITC žymenys, fluorescencijos ryškumas sumažės 50 procentų, kai 30 sekundžių apšvitinama ultravioletine šviesa. Todėl, jei ekspozicijos greitis yra per mažas, fluorescencinio vaizdo padaryti nepavyks. Bendrųjų tyrimų fluorescenciniai mikroskopai turi pusiau automatinius arba visiškai automatinius fotomikrografijos sistemos įrenginius. į
į
4. Atsargumo priemonės naudojant fluorescencinę mikroskopiją
a. Dirbkite griežtai pagal fluorescencinio mikroskopo gamyklos instrukcijų reikalavimus ir nekeiskite programos savo nuožiūra. į
b. Patikrinimas turi būti atliekamas tamsioje patalpoje. Įėję į tamsų kambarį, prijunkite maitinimo šaltinį ir 5-15 minutes uždegkite itin aukšto slėgio gyvsidabrio lempą. Kai stipri šviesa iš šviesos šaltinio yra stabili, akys visiškai prisitaiko prie tamsaus kambario ir pradeda stebėti mėginį. į
c. Kad ultravioletiniai spinduliai nepakenktų akims, reguliuodami šviesos šaltinį dėvėkite apsauginius akinius. į
d. Pageidautina, kad patikrinimo laikas būtų 1-2 val. kiekvieną kartą. Jei jis viršija 90 minučių, itin aukšto slėgio gyvsidabrio lempos šviesos intensyvumas palaipsniui mažės, o fluorescencija susilpnės; po to, kai bandinys yra apšvitintas ultravioletine šviesa 3-5 minutes, fluorescencija taip pat bus žymiai susilpnėjusi; todėl jis neturėtų viršyti daugiausiai 2-3 valandų. . į
e. Liuminescencinio mikroskopo šviesos šaltinio eksploatavimo laikas yra ribotas, todėl mėginiai turi būti tikrinami centralizuotai, kad sutaupytumėte laiko ir apsaugotumėte šviesos šaltinį. Kai oras karštas, reikia įdėti ventiliatorius, kad išsklaidytų šilumą, o naujas lemputes registruoti nuo jų naudojimo pradžios. Jei norite vėl ją naudoti po to, kai lemputė užges, prieš uždegdami turite palaukti, kol lemputė pakankamai atvės. Venkite uždegti šviesos šaltinį kelis kartus per dieną. į
f. Stebėkite mėginį iškart po dažymo, nes laikui bėgant fluorescencija palaipsniui silpnės. Jei mėginys laikomas polietileniniame plastikiniame maišelyje 4 laipsnių temperatūroje, fluorescencijos susilpnėjimo laikas gali būti atidėtas ir tvirtinimo medžiaga neišgaruoja. į
g. Fluorescencijos ryškumo vertinimo standartas: paprastai jis skirstomas į keturis lygius, tai yra, „-“ reiškia, kad fluorescencija nėra arba matoma silpnai. „pliusas“ reiškia, kad buvo matoma tik aiškiai matoma fluorescencija. „plius plius“ reiškia, kad matoma ryški fluorescencija. "plius plius plius" reiškia matomą ryškią fluorescenciją.
