Fluorescencinio mikroskopo ir įprasto optinio mikroskopo skirtumai ir charakteristikos
Fluorescencinis mikroskopas ir paprastas optinis mikroskopas skiriasi, bandinys stebimas ne apšviečiant įprastą šviesos šaltinį, o naudojant tam tikro bangos ilgio šviesos (dažniausiai ultravioletinės, mėlynai violetinės šviesos) fluorescencinės medžiagos sužadinimą bandinyje. po mikroskopu, kad fluorescencinio mikroskopo šviesos šaltinio fluorescencija būtų ne tiesioginis apšvietimas, o kaip tam tikras fluorescencinės medžiagos sužadinimas energijos šaltinio pavyzdyje. Priežastis, kodėl mes galime stebėti bandinį, yra ne dėl šviesos šaltinio apšvietimo, o dėl fluorescencijos reiškinio, kurį sukelia fluorescencinė medžiaga bandinyje, sugėrusi sužadinimo šviesos energiją. Matyti, kad fluorescencinio mikroskopo charakteristikos, daugiausia jo šviesos šaltinis, gali tiekti daug specifinio sužadinimo šviesos bangos ilgio diapazono, todėl tiriamo bandinio fluorescencinė medžiaga gali gauti reikiamą sužadinimo šviesos intensyvumą. Tuo pačiu metu fluorescencinis mikroskopas turi turėti atitinkamą filtrų sistemą. Fluorescencinis mikroskopas yra pagrindinis fluorescencinės histochemijos įrankis. Jį sudaro itin aukšto slėgio šviesos šaltinis, filtrų sistema (įskaitant sužadinimo ir slopinimo filtro plokštę), optinė sistema ir fotografinė sistema bei kiti pagrindiniai komponentai, tai tam tikro šviesos bangos ilgio naudojimas, siekiant paskatinti mėginį skleisti fluorescenciją.
1. Fluorescencinio sužadinimo būdas: pagal bangos ilgio diapazoną šviesa skirstoma į UV sužadinimo metodą (naudojant ultravioletinį apšvietimą) ir BV sužadinimo metodą (naudojant mėlyną violetinę šviesą) dviejų tipų UV sužadinimo metodas yra trumpesnis nei 400 nm, esant ultravioletinei šviesai. sužadinimas. Taikant šį metodą nėra matomos sužadinimo šviesos, todėl stebima fluorescencija rodo būdingą dažų fluorescenciją ir lengva atskirti specifinę bandinio fluorescenciją nuo foninio audinio savaiminio fluorescencijos.
2. BV sužadinimo metodas: Metodas orientuotas į 404 nm, 434 nm nuo ultravioletinės iki mėlynos sužadinimo šviesos. Šis metodas naudoja mėlyną šviesą bandiniui apšvitinti, todėl fluorescencijos stebėjimo sistemos ribinis filtras turi naudoti filtrą, kuris gali visiškai blokuoti mėlyną šviesą ir tinkamai praleisti pageidaujamą žalią ir geltoną fluorescenciją. Fluorescenciniai pigmentai fluorescencinių antikūnų metodui. Kadangi didžiausios sužadinimo šviesos sugerties bangos ilgis ir didžiausios fluorescencijos emisijos bangos ilgis yra arti vienas kito, BV sužadinimo metodu naudojami filtrai turi būti aštrių ribinių filtrų. Šis metodas naudoja mėlyną šviesą kaip sužadinimo šviesą, todėl fluorochromo sugerties efektyvumas yra didesnis ir galima gauti ryškesnį vaizdą. Trūkumas yra tas, kad fluorescencija žemiau 500 nm nesimato, o virš 500 nm visas vaizdas atrodo geltonas. Taikant fluorescencinių antikūnų metodą, didžioji dalis specifiškumo vertinama pagal unikalią fluorochromo spalvą, todėl aukščiau aprašyto BV sužadinimo metodo trūkumai dažniausiai turi itin didelę įtaką kalbant apie subtilų specifiškumą.
