Mikrobų mikroskopijos tiesioginio skaičiavimo metodo eksperimentiniai principai
Tiesioginis skaičiavimas mikroskopu naudojant hemocitometrą yra dažniausiai naudojamas mikroorganizmų skaičiavimo metodas. Šio metodo pranašumas yra tai, kad jis yra intuityvus ir greitas. Tinkamai praskiestą bakterijų suspensiją (arba sporų suspensiją) įdėkite į skaičiavimo kamerą tarp stiklelio ir hemocitometro dengiamojo stiklelio ir suskaičiuokite mikroskopu. Kadangi skaičiavimo kameros tūris yra fiksuotas (0,1 mm2), jį galima konvertuoti į bendrą mikroorganizmų skaičių tūrio vienete, remiantis mikroskopu stebimų mikroorganizmų skaičiumi. Kadangi šis metodas skaičiuoja bendrą gyvų ir negyvų bakterijų skaičių, jis taip pat vadinamas bendro bakterijų skaičiaus metodu.
Hemocitometras paprastai yra specialus stiklelis su keturiomis angomis, sudarančiomis tris platformas. Vidurinė platforma yra padalinta į dvi dalis trumpu horizontaliu grioveliu. Ant platformos kiekvienoje pusėje yra išgraviruotas kvadratinis tinklelis. Kiekvienas kvadratinis tinklelis yra padalintas į devynis didelius kvadratus. Didelė aikštė viduryje yra skaičiavimo kambarys. Mikroorganizmų skaičiavimas vyksta skaičiavimo kameroje. Hemocitometro struktūra parodyta Ⅷ-1 pav.
Skaičiavimo kameros skalė paprastai turi dvi specifikacijas. Vienas yra didelis kvadratas, padalytas į 16 vidutinių kvadratų, o kiekvienas vidutinis kvadratas padalintas į 25 mažus kvadratus (Ⅷ-2 pav.); kita – didelė aikštė. Kvadratinis tinklelis padalintas į 25 vidutinius kvadratus, o kiekvienas vidutinis kvadratas – į 16 mažų kvadratų (VIII pav.-1, C). Bet nesvarbu, kokia tai skaičiavimo lenta, mažų kvadratų skaičius kiekviename dideliame kvadrate yra vienodas, ty 16 × 25=400 mažų kvadratų, kaip parodyta Ⅷ-2 paveiksle.
Kiekvieno didelio kvadrato kraštinės ilgis yra 1 mm, taigi kiekvieno didelio kvadrato plotas yra 1 mm2. Uždengus dengiamąjį stiklą, aukštis tarp stiklelio ir dengiamojo stiklo yra 0,1 mm, taigi skaičiavimo kameros tūris yra 0,1 mm3.
Skaičiuodami paprastai suskaičiuokite bendrą bakterijų skaičių penkiuose vidutiniuose kvadratuose, tada suraskite kiekvieno vidurinio kvadrato vidutinę vertę ir padauginkite iš 16 arba 25, kad gautumėte bendrą bakterijų skaičių dideliame kvadrate, tada apskaičiuokite Konvertuoti į bendras bakterijų skaičius 1 ml bakterijų tirpalo.
