Skirtumai tarp fluorescencinės mikroskopijos ir konfokalinės mikroskopijos
Fluorescencinis mikroskopas
1. Fluorescencinis mikroskopas naudoja ultravioletinę šviesą kaip šviesos šaltinį, kad apšvitintų apžiūrint objektą, sukeldamas jį skleidžiant fluorescenciją, o po to stebėkite objekto formą ir padėtį po mikroskopu. Fluorescencinė mikroskopija naudojama tiriant medžiagų absorbciją, pernešimą, pasiskirstymą ir lokalizaciją ląstelėse. Kai kurios medžiagos ląstelėse, tokiose kaip chlorofilas, gali fluorescuoti, kai veikiama ultravioletinės spinduliuotės; Taip pat yra keletas medžiagų, kurios patys negali išsklaidyti fluorescencijos, tačiau taip pat gali skleisti fluorescenciją, jei jie dažomi fluorescenciniais dažais ar fluorescenciniais antikūnais ir apšvitintos ultravioletine šviesa. Fluorescencinė mikroskopija yra viena iš tokių medžiagų kokybinių ir kiekybinių tyrimų priemonių.
2. Fluorescencinio mikroskopo principas:
A) Šviesos šaltinis: šviesos šaltinis skleidžia įvairių bangos ilgių šviesą (nuo ultravioletinių spindulių iki infraraudonųjų spindulių).
B) sužadinimo filtro šviesos šaltinis: konkretaus bangos ilgio, kuris bandinyje gali sukelti fluorescenciją, perdavimas, tuo pačiu blokuodama šviesą, kuri yra nenaudinga jaudinančiai fluorescencijai.
C) Fluorescenciniai pavyzdžiai: paprastai dažomi fluorescenciniais pigmentais.
(D) Blokavimo filtras: jis selektyviai perduoda fluorescenciją blokuodamas sužadinimo šviesą, kurios nepavyko, o kai kurie bangos ilgiai fluorescencijoje taip pat selektyviai perduodami. Mikroskopas, kuris naudoja ultravioletinę šviesą kaip šviesos šaltinį, kad apšviestas objektas skleistų fluorescenciją. Elektronų mikroskopą pirmiausia surinko „Knorr“ ir „Haruska“ 1931 m. Berlyne, Vokietijoje. Šiame mikroskope vietoj šviesos pluošto naudojamos greitos elektronų pluoštai. Dėl daug trumpesnio elektronų srauto bangos ilgio, palyginti su šviesos bangomis, elektroninio mikroskopo padidinimas gali pasiekti 8 0 0000 kartų, o minimali skiriamoji geba yra 0,2 nanometrų. Skenavimo elektronų mikroskopas, kuris pirmą kartą buvo naudojamas 1963 m., Leidžia žmonėms pamatyti mažytes struktūras ant objektų paviršiaus.
3. Taikymo apimtis: naudojama didinti mažų objektų vaizdus. Paprastai naudojamas biologijos, medicinos, mikroskopinių dalelių ir kt. Stebėjimams stebėjimams
Konfokalinis mikroskopas
1. Konfokalinis mikroskopas prideda pusiau atspindintį pusę objektyvą į atspindėtą šviesos kelią, kuris nukreipia atspindėtą šviesą, praėjusią per objektyvą kitomis kryptimis. Jo židinio taške yra pertvara su židinio taške, esančiu židinio taške, o už tomžo yra fotomulplitier vamzdis. Galima įsivaizduoti, kad atspindėta šviesa prieš ir po aptikimo šviesos fokusavimo negali būti sutelktas į mažą skylę per šią konfokalinę sistemą ir ją užblokuos pertvara. Taigi fotometras matuoja atspindėtą šviesos intensyvumą židinio taške.
2. Principas: Tradiciniai optiniai mikroskopai naudoja lauko šviesos šaltinius, o kiekvieno pavyzdžio taško vaizdą veikia difrakcija arba išsklaidyta šviesa iš kaimyninių taškų; Lazerio nuskaitymo konfokalinis mikroskopas naudoja lazerio pluoštą, kad apšviestų smaigalį ir sudarytų taškinį šviesos šaltinį, kad būtų galima nuskaityti kiekvieną pavyzdžio židinio plokštumos tašką. Pavyzdžio apšviestas taškas pavaizduotas aptikimo kaiščio skylėje ir yra gautas taške arba linijoje fotomultiplier vamzdžio (PMT) arba šalto sujungimo įtaiso (CCCD), aptikus smaigalį, greitai suformuodamas fluorescencinį vaizdą kompiuterio monitoriaus ekrane. Apšvietimo kaiščio ir aptikimo smaigalys yra konjuguoti, palyginti su objektyvo židinio plokštuma. Židininės plokštumos taškai tuo pačiu metu yra sutelkti į apšvietimo smaigalį ir emisijos skylę, o taškai, esantys už židinio plokštumos, nebus vaizduojami aptikimo smaigalyje. Gautas konfokalinis vaizdas yra bandinio optinis skerspjūvis, įveikiantis neryškių vaizdų trūkumą bendrais mikroskopais.
