Mikroorganizmų skaičiaus nustatymas-Mikroskopinis tiesioginio skaičiavimo metodas!
Bakterijų populiacijos augimas pasireiškia ląstelių skaičiaus padidėjimu arba ląstelinės medžiagos padidėjimu. Ląstelių skaičiaus nustatymo metodai apima tiesioginį mikroskopinį skaičių, plokštelių skaičių, drumstumo įvertinimą spektrofotometru, labiausiai tikėtiną skaičių MPN ir membraninį filtravimą. (membraninis filtravimas) ir tt Ląstelinių medžiagų matavimo metodai apima ląstelių sausosios masės nustatymą, tam tikrų ląstelių komponentų, tokių kaip azoto kiekis, RNR ir DNR kiekis, ir metabolitų produktų nustatymą. Trumpai tariant, yra daug mikrobų augimo matavimo metodų, kurių kiekvienas turi savo privalumų ir trūkumų. Metodas turėtų būti parinktas atsižvelgiant į konkrečius darbo reikalavimus. Šis eksperimentas daugiausia supažindina su tiesioginio skaičiavimo mikroskopu metodu, kuris dažniausiai naudojamas gamyboje ir moksliniuose tiriamuosiuose darbuose.
1. Paskirties reikalavimai
1. Išsiaiškinkite skaičiavimo principą su kraujo ląstelių skaičiavimo lenta.
2. Įvaldyti mikroorganizmų skaičiavimo metodą naudojant kraujo ląstelių skaičiavimo lentą.
2. Pagrindiniai principai
Tiesioginio skaičiavimo mikroskopu metodas – tai paprastas, greitas ir intuityvus metodas, kai nedidelis tiriamo mėginio suspensijos kiekis uždedamas ant specialaus objektinio stiklelio su nustatyto ploto ir tūrio (taip pat vadinamas bakteriometru) ir skaičiuojamas tiesiai po mikroskopu. Metodai. Šiuo metu namuose ir užsienyje dažniausiai naudojami bakteriometrai: hemocitometras, Peteroff-Hauser bakteriometras, Hawksley bakteriometras ir kt. Visi jie gali būti naudojami mielių, bakterijų, pelėsių sporų ir kitų suspensijų skaičiavimui, o pagrindiniai principai yra tie patys. Pastarųjų dviejų bakterijų skaitiklių bendras tūris yra 0.02 mm3 uždengus dengiamuoju stiklu, o atstumas tarp dengiamojo stiklo ir stiklelio yra tik 0,02 mm. Todėl alyvos imersinis objektyvas gali būti naudojamas stebėti ir aptikti mažesnes ląsteles, tokias kaip bakterijos. skaičiuoti. Be šių bakteriometrų naudojimo, taip pat yra įvertinimo metodas, kuris tiesiogiai stebi tepinėlio ploto ir regėjimo lauko ploto santykį po mikroskopu. Šis metodas dažniausiai naudojamas bakteriologiniam pieno tyrimui. Tiesioginio mikroskopo skaičiavimo metodo pranašumai yra tai, kad jis yra intuityvus, greitas ir paprastas. Tačiau šio metodo trūkumas yra tas, kad išmatuotas rezultatas dažniausiai yra negyvų ir gyvų bakterijų suma. Šiuo metu yra keletas būdų, kaip pašalinti šį trūkumą, pavyzdžiui, derinant gyvybingas bakterijas, dažančias mikrokamerinę kultūrą (trumpą laiką) ir pridedant ląstelių dalijimosi inhibitorių, kad būtų pasiektas tikslas skaičiuoti tik gyvybingas bakterijas.
Šiame eksperimente naudojamas hemocitometras kaip pavyzdys tiesioginiam skaičiavimui mikroskopu atlikti. Dėl kitų dviejų bakteriometrų naudojimo žr. kiekvieno gamintojo instrukcijas. Tiesioginis skaičiavimas mikroskopu naudojant hemocitometrą yra dažniausiai naudojamas mikrobų skaičiavimo metodas. Skaičiavimo lenta yra speciali čiuožykla su keturiais grioveliais, suformuojančiais tris platformas; platesnė platforma viduryje trumpu horizontaliu grioveliu padalinta į dvi dalis, o kiekvienoje platformos pusėje yra tinklelis. Kiekvienas kvadratinis tinklelis yra padalintas į devynis didelius kvadratus, o didelis kvadratas viduryje yra skaičiavimo kambarys. Kraujo ląstelių skaičiavimo lentos struktūra parodyta {{0}} paveiksle. Paprastai yra dvi skaičiavimo kameros skalės specifikacijos. Vienas yra didelis kvadratas, padalintas į 25 vidutinius kvadratus, o kiekvienas vidutinis kvadratas yra padalintas į 16 mažų kvadratų (15-2 pav.); kita – didelė aikštė. Kvadratinis tinklelis yra padalintas į 16 vidutinių kvadratų, o kiekvienas vidutinis kvadratas yra padalintas į 25 mažus kvadratus. Tačiau nesvarbu, kokia tai skaičiavimo lenta, kiekviename dideliame langelyje yra 400 mažų kvadratėlių. Kiekvieno didelio kvadrato kraštinės ilgis yra lmm, tada kiekvieno didelio kvadrato plotas yra lmm2. Uždengus dengiamąjį stiklelį, aukštis tarp dengiamojo stiklelio ir stiklelio yra 0,lmm, taigi skaičiavimo kameros tūris yra 0,lmm3 (viena dešimtoji tūkstantoji mililitro dalis). Paveikslas 15-1 Kraujo ląstelių skaičiavimo lentos struktūra (1) Paveikslas 15-2 Kraujo ląstelių skaičiavimo lentos struktūra (2) A. Vaizdas iš priekio; B. Išilginis pjūvis; padidintas kvadratinis tinklelis, didelis kvadratas viduryje yra skaičiavimo kamera 1. Kraujo ląstelių skaičiavimo lenta; 2. Dengiamoji juosta; 3. Skaičiuodami skaičiavimo kameroje, paprastai suskaičiuokite bendrą bakterijų skaičių penkiuose kvadratuose, tada suraskite kiekvieno kvadrato vidutinę vertę ir padauginkite iš 25 arba 16, kad gautumėte. Tada bendras bakterijų skaičius dideliame kvadrate konvertuojamas. į bendrą bakterijų skaičių 1 ml bakterijų tirpalo. Tarkime, kad bendras bakterijų skaičius penkiuose viduriniuose kvadratuose yra A, o bakterijų tirpalo praskiedimo koeficientas yra B. Jei tai yra skaičiavimo plokštelė su 25 viduriniais kvadratais, tai bendras bakterijų skaičius 1 ml bakterijų tirpalo {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (gabalai) Lygiai taip pat, jei tai yra skaičiavimo plokštelė su 16 kvadratų, bendras bakterijų skaičius 1 ml bakterijų tirpalo {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (gabalais),
