Mikrobų populiacijos nustatymas – tiesioginio mikroskopinio skaičiavimo metodas!
I. Tikslo reikalavimai
1, Išaiškinti hematokrito plokštelių skaičiavimo principą.
2, Įvaldykite mikrobų skaičiavimo metodą naudojant hematokrito plokštelę.
II. Pagrindiniai principai
Tiesioginio mikroskopo skaičiavimo metodas yra nedidelis mėginio suspensijos kiekis, kuris turi būti tiriamas ant specialaus objektinio stiklelio su apibrėžtu plotu ir tūriu (taip pat žinomas kaip bakteriologinis skaitiklis), mikroskopu tiesiogiai skaičiuojant paprastu, greitu ir intuityviu metodu. Šiuo metu šalyje ir užsienyje dažniausiai naudojami bakteriologiniai skaitikliai yra: kraujo ląstelių skaičiavimo plokštelė, Peteroff-Hauser bakteriologiniai skaitikliai ir Hawksley bakteriologiniai skaitikliai ir kt., kuriuos galima naudoti mielėms, bakterijoms, pelėsių sporoms ir kitoms skaičiavimo suspensijoms, pagrindinis principas. yra tas pats. Pastarųjų dviejų tipų skaitiklių bendras tūris yra 0.02 mm3 uždėjus dengiamąjį stiklelį, o atstumas tarp dengiamojo stiklelio ir laikiklio pjūvio yra tik 0,02 mm, todėl mažesnės ląstelės, pvz. Bakterijas galima stebėti ir suskaičiuoti su panardinamuoju aliejaus objektyvu. Be šių skaitiklių naudojimo, taip pat yra tepinėlio ploto ir matymo lauko ploto santykio, stebimo tiesiai po mikroskopu, įvertinimo metodas, kuris dažniausiai naudojamas bakteriologiniam karvės pieno tyrimui. Tiesioginio mikroskopinio skaičiavimo metodo privalumai yra intuityvūs, greiti ir lengvai valdomi. Tačiau šio metodo trūkumas yra tas, kad rezultatas dažniausiai yra negyvų ir gyvų organizmų suma. Yra keletas būdų, kaip įveikti šį trūkumą, pavyzdžiui, derinant gyvų bakterijų dažytą mikrokamerinę kultūrą (trumpą laiką) ir pridedant citokinezės inhibitorių, kad būtų galima skaičiuoti tik gyvus organizmus.
Operacijos žingsniai
1, Bakterijų suspensijos paruošimas
Naudokite sterilų fiziologinį tirpalą, kad pagamintumėte tinkamos koncentracijos alaus mielių bakterinę suspensiją.
2, veidrodžio skaičiavimo kamera
Prieš dedant mėginius, pirmiausia reikia apžiūrėti skaičiavimo plokštelės skaičiavimo kamerą. Jei yra nešvarumų, prieš skaičiuojant jį reikia nuvalyti ir nusausinti.
3, pridėti pavyzdžių
Nuvalykite ir išdžiovinkite kraujo ląstelių skaičiavimo plokštelę, padengtą dengiamuoju stikleliu, o tada sterilia kapiliarine biurete pakratykite alaus mielių suspensiją nuo dengiamojo stiklelio krašto, kad lašelis nulašėtų, kad bakterijų skystis išilgai tarpo kapiliaru prasiskverbtų į skaičiavimo kamera automatiškai, paprastai skaičiavimo kamera gali būti užpildyta bakteriniu skysčiu. Imant mėginius pirmiausia reikia gerai sukratyti bakterijų tirpalą; dedant mėginius, skaičiavimo kameroje neturi būti oro burbuliukų.
4, Skaičiavimas mikroskopu
Įdėję mėginį, leiskite jam pailsėti 5 min., tada uždėkite kraujo ląstelių skaičiavimo plokštelę ant mikroskopo laikiklio, pirmiausia suraskite skaičiavimo kameros vietą su mažu padidinimu, o tada pakeiskite ją į didelį padidinimą, kad būtų galima skaičiuoti. Tinkamai sureguliuokite mikroskopo šviesos intensyvumą, nes mikroskopas su reflektorine šviesa taip pat turėtų atkreipti dėmesį į tai, kad šviesa nebūtų pakreipta į vieną pusę, nes kitaip matymo lauką nebus lengva išryškinti skaičiavimo kameros tinklelio linija, arba matyti tik vertikalią liniją arba tik horizontalią liniją. Jei prieš skaičiuojant nustatoma, kad bakterinis skystis yra per tirštas arba per plonas, prieš skaičiuojant būtina iš naujo sureguliuoti praskiedimą. Tinkami bendri mėginio praskiedimo reikalavimai, kai kiekvienoje ląstelėje yra maždaug 5–10 bakterijų. Kiekvienai skaičiavimo kamerai skaičiuoti atrenkami organizmai 5 viduriniuose skyriuose (4 kampuose ir vienas vidurinis skyrius centre). Tinklelio linijose esantys organizmai paprastai skaičiuojami tik viršutinėje ir dešinėje eilutėse. Mielių pumpurų atsiradimo atveju, kai pumpurinis kūnas pasiekia pusę motininės ląstelės dydžio, jis skaičiuojamas kaip du organizmai. Mėginio iš dviejų skaičiavimo kamerų skaičiavimas pagal vidutinę vertę, siekiant apskaičiuoti bakterijų kiekį mėginyje.
5. Hematokrito plokštelės valymas
Po naudojimo kraujo ląstelių skaičiavimo plokštelę išskalaukite vandeniu po čiaupu, nenaudokite kietų daiktų skalbimui ir šepečiui, nedžiovinkite patys arba naudokite plaukų džiovintuvą, kad po plovimo nusausintumėte. Mikroskopu apžiūrėkite plokštelę, kad pamatytumėte, ar kiekviename skyriuje nėra likusių organizmų ar kitų nuosėdų. Jei jis nėra švarus, plovimas turi būti kartojamas, kol jis bus švarus.
