Fazinio kontrasto mikroskopijos derinimo metodai ir žingsniai
a. Reguliuodami Kuhler apšvietimo sistemą, naudokite šviesaus lauko metodą, kad mėginys būtų aiškiai sufokusuotas;
b. Pasukite prožektorių į Ph1 ir sulygiuokite su skalės linija ant patefono. Pasirinkite 10 x fazės kontrasto objektyvą ir pakeiskite jį skaidriu mėginiu, kurį reikia stebėti;
c. Nuimkite vieną iš okuliarų, pakeiskite jį centruojančiu teleskopu ir sufokusuokite du kontrastinius žiedus matymo lauke (juodą objektyvo kontrastinį žiedą ir kondensatoriaus lęšio pralaidumo kontrastinį žiedą);
d. Du skirtingi žiedai matymo lauke nebūtinai gali sutapti. Sureguliuokite du prožektoriaus reguliavimo įtaisus (sureguliuokite kairę ir dešinę skirtumo žiedų padėtis reguliavimo strypais ir trinties tipo rankenėlėmis, skirtomis priekinei ir galinei padėčiai reguliuoti), kad skaidrus žiedas judėtų pirmyn ir atgal, kad sutaptų su juodu žiedu. ;
e. Sureguliavę, perjunkite atgal į stebėjimo okuliarą ir paspauskite žalią filtrą į optinį kelią, kad stebėtumėte mėginio fazių skirtumo vaizdą;
f. Stebint su 20 x ir 40 x objektyvais, prožektorius turi būti nustatytas į padėtį Ph2, o naudojant 100 x objektyvą, prožektorius turi būti nustatytas į Ph3 padėtį.
Naudojimo sritis: tinka stebėti skaidrius, nedažytus ar nedažytus mėginius, tokius kaip įvairios ląstelės, gyvi audiniai, nedažyti arba nedažyti audinių gabalai, vandens organizmai ir kt.
Pagrindinis fazinio kontrasto mikroskopo principas
Kai šviesa praeina per gana skaidrų pavyzdį, šviesos bangos ilgis (spalva) ir amplitudė (ryškumas) reikšmingai nepasikeičia. Todėl stebint nedažytus mėginius (pvz., gyvas ląsteles) įprastu optiniu mikroskopu, dažnai sunku atskirti jų morfologiją ir vidinę struktūrą. Tačiau dėl skirtingų ląstelės dalių lūžio rodiklio ir storio skirtumų tiesioginės ir difrakcinės šviesos optinis kelias, praeinant pro šį pavyzdį, skirsis. Didėjant arba mažėjant optiniam keliui, pasikeis greitėjančių arba vėluojančių šviesos bangų fazė (dėl fazių skirtumo). Šviesos fazių skirtumo negalima pajusti plika akimi, tačiau fazių skirtumo mikroskopas gali naudoti specialų prietaisą - apskritą apertūrą ir fazinę plokštę, o šviesos interferencinį reiškinį paversti šviesos fazių skirtumu amplitudės skirtumu. (šviesos ir tamsos skirtumas), kurį gali aptikti žmogaus akis. Dėl to iš pradžių skaidrus objektas rodo akivaizdžius šviesos ir tamsos skirtumus, padidina kontrastą ir leidžia mums aiškiai stebėti gyvas ląsteles ir tam tikras smulkias struktūras ląstelių viduje, kurių negalima matyti arba aiškiai matyti įprastuose optiniuose mikroskopuose ir tamsaus lauko mikroskopuose.
Fazinio kontrasto mikroskopo vaizdavimo principas: optinis šaltinis gali praeiti tik per skaidrų apskritos diafragmos žiedą, kuris vėliau sufokusuojamas į šviesos spindulį. Kai šis šviesos pluoštas praeina per bandomąjį objektą, jis patiria įvairaus laipsnio nuokrypį (difrakciją) dėl skirtingų kiekvienos dalies optinių takų. Dėl to, kad skaidraus žiedo suformuotas vaizdas sutampa su konjuguotu paviršiumi ant fazinės plokštės ir židinio plokštumos už objektyvo. Todėl nenukrypusi tiesioginė šviesa praeina per konjuguotą paviršių, o nukrypusi difrakuota šviesa – per kompensacinį paviršių. Dėl skirtingų fazinės plokštės konjuguoto paviršiaus ir kompensacinio paviršiaus savybių jie atitinkamai sukurs tam tikrą fazių skirtumą ir šviesos, praeinančios per šias dvi dalis, intensyvumo sumažėjimą. Tada du šviesos rinkiniai susilies per galinį objektyvą ir judės tuo pačiu optiniu keliu, sukeldami tiesioginės ir difraktinės šviesos trukdžius, fazių skirtumą pakeisdami į amplitudės skirtumą. Tokiu būdu fazių kontrasto mikroskopijos metu fazių skirtumas, kurio žmogaus akis neatskiria, paverčiamas amplitudės skirtumu (ryškumo skirtumu), kurį žmogaus akis gali atskirti per bespalvio skaidraus kūno šviesą.
