Konfokalinio mikroskopo ir įprasto optinio mikroskopo palyginimas
Mikroskopas yra pagrindinis ląstelių stebėjimo įrankis. Priklausomai nuo šviesos šaltinio, jį galima suskirstyti į dvi kategorijas: optinį mikroskopą ir elektroninį mikroskopą. Pirmasis naudoja matomą šviesą (ultravioletinį mikroskopą į ultravioletinę šviesą) kaip šviesos šaltinį, o antrasis kaip šviesos šaltinį naudoja elektronų pluoštą. Įprastas optinis mikroskopas ir lazerinis konfokalinis mikroskopas priklauso tam pačiam optiniam mikroskopui.
I. Bendrasis optinis mikroskopas
Įprastas biologinis mikroskopas susideda iš trijų dalių, būtent: ① apšvietimo sistemos, įskaitant šviesos šaltinį ir kondensatorių; ② optinio padidinimo sistema, susidedanti iš objektyvų ir okuliarų, yra pagrindinis mikroskopo korpusas, siekiant pašalinti sferinę aberaciją ir chromatinę aberaciją, okuliarus ir objektyvus sudaro sudėtinga lęšių grupė; ③ mechaninis įtaisas, naudojamas medžiagai pritvirtinti ir patogumui stebėti.
Mikroskopo objektas yra aiškus ne tik nustatomas pagal padidinimą, bet ir su mikroskopo skiriamąja geba (raiška), skiriamoji geba nurodo mikroskopą (arba žmogaus akis nuo taikinio 25cm) gali atskirti objektą zui nedideliais intervalais gebėjimą Skiriamosios galios dydis nustatomas pagal šviesos bangos ilgį ir veidrodžio burnos greitį bei terpės lūžio rodiklį, išreikštą formule:
R=0.61λ /NANA=nsin /2 čia: n=terpės lūžio rodiklis;=veidrodžio burnos kampas (pavyzdys ant objektyvo lęšio įtempimo kampo žiočių), NA=veidrodžio burnos greitis (skaitinė diafragma). Veidrodžio angos kampas visada turi būti mažesnis nei 180?, todėl sina/2 zui reikšmė būtinai yra mažesnė nei 1.
Optinių lęšių gamyboje naudojamo stiklo lūžio rodiklis yra 1,65 ~ 1,78, naudojamos terpės lūžio rodiklis kuo arčiau stiklo, tuo geriau. Sausam objektyvui, oro terpė, veidrodžio burnos dažnis paprastai yra 0.05 ~ 0,95; aliejiniai lęšiai su kedro aliejumi kaip terpė, veidrodinis burnos dažnis gali būti artimas 1,5.
Įprastas šviesos bangos ilgis yra 400~700 nm, todėl mikroskopo skiriamosios gebos vertė bus ne mažesnė kaip 0,2 μm, žmogaus akies skiriamoji geba yra 0,2 mm, todėl bendras mikroskopo zui padidinimo dizainas paprastai yra 1000X.
Antra, lazerinis konfokalinis skenuojantis mikroskopas
Lazerinis konfokalinis skenuojantis mikroskopas (lazerinis konfokalinis skenuojantis mikroskopas), su lazeriu kaip skenuojančiu šviesos šaltiniu, taškas po taško, linija po linijos, paviršius po paviršiaus greito skenavimo vaizdų, skenuojančio lazerio ir bendro objektyvo fluorescencijos rinkinys, objektyvo skenavimo lazerio fokusavimo taškas , bet ir momentinis objekto taško vaizdavimas. Dėl trumpesnio lazerio spindulio bangos ilgio spindulys yra labai smulkus, todėl konfokalinis lazerinis skenuojantis mikroskopas turi didelę skiriamąją gebą, maždaug 3 kartus didesnę nei įprasto optinio mikroskopo. Sistema sufokusuojama vieną kartą ir nuskaitoma tik viena mėginio plokštuma. Kai fokusavimo gylis nėra vienodas, galima gauti skirtingų mėginio gylio lygių vaizdus, o ši vaizdo informacija yra saugoma kompiuteryje, atliekant kompiuterinę analizę ir modeliavimą, ji gali parodyti trimatę ląstelės mėginio struktūrą. .
