Biologinis mikroskopas dėl audinių blokų tūrio
Biologinė mikroskopija Iki šiol fiksavimas šaltai, šaldytas itin plonas pjūvis ir džiovinimas šaldant yra įprasti audinių ir ląstelių rentgeno mikropjūvio metodai. Toliau pateikiama šio metodo detalė:
Biologiniai mikroskopai. Mikroskopuose su kondensatoriumi kondensatorius gali būti judinamas aukštyn ir žemyn, kad būtų pasiektas vidutinis ryškumas. Be to, kintamų šviesos diodų diafragmą galima keisti, kad būtų pasiektas vidutinis 9b ryškumas. Jei šviesa yra ryški, kondensatorius gali būti atitinkamai pakeltas ir kintamos šviesos diafragma gali būti atitinkamai padidinta. Jei šviesa per stipri, galima atitinkamai nuleisti kondensatorių ir atitinkamai sumažinti skersinio šviesos pluošto diafragmą. Jei tokioje situacijoje vis tiek jaučiatės apakinti, galite pasirinkti tinkamą filtrą ir uždėti jį ant laikiklio po kondensatoriumi. Tokiu būdu galite gauti jus tenkinantį ryškumą. Žinoma, norint įgyti patirties reguliuoti kondensatoriaus padėtį aukštyn ir žemyn, kad būtų pasiektas kintamas diafragmos dydis, ir pasirenkant tinkamus filtrus, reikia tam tikro laiko praktikos.
Labai svarbi biologinės mikroskopijos problema yra ta, kad ląstelių surinkimo ir atskyrimo metu, po džiovinimo šalčiu ir dervos įterpimo (FD), užšaldžius itin plonas granules ir po džiovinimo šalčiu, kiekvienoje dalyje turi būti 65 elementai. būti analizuojami labai kruopščiai ir visiškai Nepažeiskite analizuojamų ląstelių. Mat rentgeno mikrozonų analizė apima ne tik daug etapų, bet ir kainuoja nemažai. Jei po ilgo laiko ir kelių žingsnių analizuojamos ląstelės yra pažeistos arba negyvos ląstelės, būtų gaila daryti klaidingas išvadas. Pavyzdžiui, po gydymo kolagenaze išskirti kardiomiocitai yra dviejų formų: viena yra ilgos lazdelės formos, kita – apvali. Pastarosios yra mirštančios ląstelės, kurios pažeidžiamos ląstelių išskyrimo metu.
Biologinė mikroskopija Elektrolitų kiekis ir pasiskirstymas šių dviejų tipų ląstelėse labai skiriasi. Apvaliuose kardiomiocituose Na yra labai daug, o K labai mažai, o linijinėse šakose Ca koncentracija yra labai didelė. Patikrinus kitais analizės metodais, buvo įrodyta, kad didelis Na ir mažas K apvaliose ląstelėse ir didelis ca mitochondrijose atsirado dėl ląstelės membranos pažeidimo ląstelių atskyrimo proceso metu. Ląstelių ir audinių šalto fiksavimo metodas dažnai yra pirmiausia juos užgesinti ir fiksuoti, o tada laikyti skystame azote. Užgesinimas ir fiksavimas yra labai svarbūs konservavimo efektui. Gyvose ląstelėse arba šviežiuose audiniuose gausu vandens. Gesinant pirmiausia užšaldomos ir fiksuojamos tos ląstelių ar audinių dalys, kurios tiesiogiai liečiasi su kriogenu (ypač gesinant skystu azotu), taip susidaro „apvalkalas“, kuris trukdo Centrinė ląstelių dalis buvo sutraiškyta. ir šaltai fiksuotas. Todėl, atliekant X linijos mikrozonų analizę, dažnai nustatoma, kad didesnių ląstelių centre yra ledo kristalų. Kad taip nenutiktų, kaip susmulkintas šaltnešis naudojama medžiaga, kurios lydymosi temperatūra aukštesnė nei skystojo azoto, bet mažesnė -806c sausumas. Tokių medžiagų yra daug, tačiau lengviausias ir pigiausias yra koncentruotas propanas (virimo temperatūra - 42,120c, lydymosi temperatūra - 187.10c, molekulinė masė 44,1), o aušinimo greitis taip pat yra didžiausias. Tačiau jo trūkumas yra tai, kad jis yra degus.
Biologinis mikroskopas gali įdėti raumenų skaidulą ant specialaus rėmo. Kai raumenų skaidulų susitraukimas pasiekia tam tikrą fazę ir ją reikia fiksuoti, antgalis nedelsiant paleidžiamas purškiant skystą propaną į raumeninę skaidulą, kad ją užgesintų ir fiksuotų. Tada raumenų skaidulos kartu su rėmu buvo išimtos ir patalpintos į skystą azotą. Jei kraujo ląstelės arba atskirtos ląstelės yra fiksuotos, pirmiausia centrifuguokite mažu greičiu, kad sukoncentruotumėte ląsteles, perkelkite ląsteles į mažą sidabrinį vamzdelį, turintį gerą šilumos laidumą, įdėkite mėgintuvėlį į skystą propaną ir užšaldykite, kad sutvirtintumėte. Tvirtindami žiurkės kasą Hall laboratorijoje, iš pradžių du plieninius blokus atvėsinkite skystu heliu (arba skystu azotu), du varinius blokus suspauskite žnyplėmis ir padėkite prieš ir už kasos, kad užgesintumėte ir sutvirtintumėte gimdos liauką. . Audinius ar ląsteles galima gesinti ir fiksuoti, o tada perkelti į skystą azotą ilgalaikiam saugojimui.
