Pagrindinė konfokalinės fluorescencinės mikroskopijos struktūra
(1) Nuskaitymo modulis
Nuskaitymo modulį daugiausia sudaro šviesos juosta (valdanti optinių pjūvių storį), spektroskopas (keičiantis šviesos sklidimo kryptį pagal bangos ilgį), emisijos fluorescencinis kolorimetras (kuris aptikimui parenka šviesą tam tikro bangos ilgio diapazone) ir detektorius (fotodaugintuvo vamzdelis). Fluorescenciniame mėginyje esanti mišri fluorescencija patenka į skaitytuvą, o atrinkta aptikimo skylės šviesos juosta, spektrometru ir kolorimetru, ji yra padalinta į įvairias monochromatines fluorescencijas, kurios aptinkamos skirtinguose fluorescencijos kanaluose ir sudaro atitinkamus konfokalinius vaizdus. Tuo pačiu metu kompiuterio ekrane gali būti rodomi keli lygiagrečiai monochromatiniai fluorescenciniai vaizdai ir jų sudėtiniai vaizdai.
(2) Fluorescencinė mikroskopinė sistema
Mikroskopas yra pagrindinis LSCM komponentas, susijęs su sistemos vaizdo kokybe. Mikroskopo optinį kelią galima lengvai įterpti į be galo nutolusią optinę sistemą su optinėmis parinktimis, nepažeidžiant vaizdo kokybės ir matavimo tikslumo. Objektyvas turėtų būti didelės skaitinės diafragmos plokščio lauko apochromatinis objektyvas, kuris yra naudingas fluorescencijai gauti ir aiškiam vaizdavimui. Objektyvo lęšių grupės konvertavimą, spalvų filtrų grupės pasirinkimą, scenos judesių reguliavimą ir židinio plokštumos užrakinimą atmintyje turėtų automatiškai valdyti kompiuteris.
Fluorescencinis mikroskopas, naudojamas atliekant lazerinę skenuojančią konfokalinę mikroskopiją, paprastai yra toks pat kaip ir įprastas fluorescencinis mikroskopas, tačiau jis turi savo ypatybes: jį reikia prijungti prie skaitytuvo, kad lazeris galėtų patekti į mikroskopo objektyvą, apšvitinti mėginį ir padaryti mėginio skleidžiama fluorescencija pasiekia detektorių; Reikalingas šviesos kelio keitimo įrenginys, kuris gyvsidabrio lempas paverčia lazeriais, galima reguliuoti gyvsidabrio lempos šviesos intensyvumą.
(3) Įprasti lazeriai
Lazeriniai šaltiniai, naudojami atliekant lazerinę skenavimo konfokalinę mikroskopiją, apima vieno lazerio ir kelių lazerių sistemas, o dažniausiai naudojami lazeriai yra trijų tipų:
Puslaidininkinis lazeris: 405 nm (prie ultravioletinės spektrinės linijos)
Argono jonų lazeris: 457 nm, 477 nm, 488 nm, 514 nm (mėlyna žalia šviesa)
He-Ne lazeris: 543 nm (žalios šviesos He-Ne žalias lazeris) 633 nm (raudonos šviesos He-Ne raudonas lazeris)
UV lazeris (UV lazeris): 351 nm, 364 nm (UV šviesa)
(4) Pagalbinė įranga
Oru aušinami, vandeniu aušinami aušinimo sistemos ir reguliuojami maitinimo šaltiniai.
Pagrindinis lazerinio skenuojančio konfokalinio mikroskopo veikimo principas yra pirmiausia iš lazerio išspinduliuoti tam tikro bangos ilgio sužadinimo šviesą. Po stiprinimo šviesa praeina pro apšviestą skaitytuvo skylutės šviesos juostą ir sudaro taškinį šviesos šaltinį. Objektyvo lęšis sufokusuoja mėginio židinio plokštumą, o atitinkami apšviesti mėginio taškai yra sužadinami ir skleidžia fluorescenciją. Praėjęs pro aptikimo angos šviesos juostą, jis pasiekia detektorių ir vaizduojamas kompiuterio stebėjimo ekrane. Tokiu būdu pilnas konfokalinis vaizdas susidaro iš kiekvieno mėginio taško fluorescencinių vaizdų židinio plokštumoje, kuri vadinama šviesos pjūviu.
